分子植物育种
(
网络版
), 2016
年
,
第
14
卷
,
第
1040
-
1047
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2016, Vol.14, 1040
-
1047
Copyright © 2016 BioPublisher 1040
研究报告
Research Report
葡萄广谱抗病毒
RNAi
载体构建及对合子胚起源的体细胞胚的遗传转化
田莉莉
,
牛良
中国农业科学院郑州果树研究所
,
河南省果树瓜类生物学重点实验室
,
农业部果树育种技术重点实验室
,
郑州
, 450009
通讯作者
,
作者
分子植物育种
, 2016
年
,
第
14
卷
,
第
7
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2016.14.0007
这是一篇采用
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引用格式
(
中文
)
：
田莉莉等
, 2016,
葡萄广谱抗病毒
RNAi
载体构建及对合子胚起源的体细胞胚的遗传转化
,
分子植物育种
(online), 14(7): 1040-1047 (doi:
10.5376/mpb.cn.2016.14.0007)
引用格式
(
英文
)
：
Tian et al., 2016,
Construction of Broad-spectrum Virus Resistant RNAi Vector of
Vitis
and Genetic Transformation to Zygotic Embryo-derived Somatic
Embryos, Fenzi Zhiwu Yuzhong (online) (Molecular Plant Breeding), 14(7): 1040-1047 (doi: 10.5376/mpb.cn.2016.14.0007)
摘
要
病毒病对世界葡萄生产危害严重。为创制广谱抗病毒植物新材料，本研究采用
RT-PCR
分别克隆获得了葡萄扇叶
病毒、葡萄卷叶病毒、葡萄病毒
A
和葡萄病毒
B
的外壳蛋白基因保守片段，用重叠延伸
PCR
方法串联获得了
825 bp
的大片
段“
GV
”，以此串联基因片段用作干扰片段，采用
Gateway
技术构建了同时含有
4
种病毒
CP
基因片段的
RNAi
植物表达
载体“
Ph12-GV
”，冻融交替法将其转入农杆菌菌株
EHA105
中。采用根癌农杆菌介导法遗传转化“红宝石无核”葡萄合子
胚诱导发生的体细胞胚，
RT-PCR
的检测结果显示，目的基因片段成功转入葡萄中并在
RNA
水平上得到表达
关键词
葡萄
,
抗病毒
, RNAi
载体
,
体细胞胚
,
遗传转化
Construction of Broad-spectrum Virus Resistant RNAi Vector of
Vitis
and
Genetic Transformation to Zygotic Embryo-derived Somatic Embryos
Tian Lili , Niu Liang
Key Laboratory of Fruit Breeding Technology, Ministry of Agriculture of China, Henan Provincial Key Laboratory of Fruit and Cucurbit Biology, Zhengzhou
Fruit Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Zhengzhou, 450009
Corresponding author,
;
Author
Abstract
Virus diseases have been the most serious problem for grape cultivation around the world. In order to develop novel
materials of broad-spectrum virus-resistant plant, we cloned the conserved fragments of coat protein genes of grapevine fanleaf virus,
grapevine leafroll virus, grapevine virus A, and grapevine virus B separately by RT-PCR, connecting them to form a big fragment of
GV (825 bp) as interference fragment by overlapping PCR. Using this fragment as the interference fragment, the plant RNAi
expression vector of Ph12-GV containing 4 kinds of virus CP gene fragments was constructed by gateway technology. And the RNAi
vector was transformed into
Agrobacterium
strain EHA105 by alternate freezing and thawing method. Then, it was used to transform
the somatic embryos which were induced from zygotic embryos of European
Vitis
c. v. Ruby Seedless by
Agrobacterium
mediated
method. Results of RT-PCR showed that the target gene fragment were successfully transformed into the embryos and expressed at
the RNA level.
Keywords
Vitis
, Broad-spectrum virus resistance, RNA interfere vector, Somatic embryos, Genetic transformation
研究背景
葡萄是世界上最古老的果树树种之一，以其味
美多汁、营养丰富及具有多种的保健功能而深受国
内外消费者喜爱，同时也是感染病毒种类最多的果
树树种，目前已知的侵染葡萄的病毒有
63
种
(
任芳
等
, 2013)
。近年来，我国葡萄产业得到迅猛发展，
病毒病的传播和发生也日益严重。据调查，我国各
大葡萄产区的主栽品种和砧木多数带毒，部分品种
带毒株率最高可达
100%
，同一品种被不同病毒复
合侵染的情况也十分常见
(
刘晓等
, 2006)
。植株一旦
受到病毒侵染后则会终身带毒，持久危害，并且目
前尚无用于防治病毒病的有效药剂，给果树产业造
成严重的经济损失，培育抗病品种无疑是解决这一
问题的根本途径。
和传统的育种技术相比较，基因工程的应用大
大提高了植物育种效率，尤其是结合
RNA
干扰
收稿日期：
2016
年
03
月
01
日
接受日期：
2016
年
04
月
05
日
发表日期：
2016
年
04
月
07
日
基金项目：本研究由国家自然科学基金项目
(31071768)
资助。
