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李健等：凤丹 SRAP-PCR 反应体系的优化
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图 1 不同反应体系中‘凤丹’基因组 DNA 的 SRAP-PCR 扩
增结果(引物: Me2-Em10)
注: M: 100 bp Plus DNA Ladder; 1~16: 反应体系编号
Figure 1 SRAP-PCR amplification results of genomic DNA
from paeonia ostii in different reaction systems (primer:
Me2-Em10)
Note: M: 100 bp Plus DNA Ladder; 1~16: No of amplification
systems
1.2‘凤丹’SRAP 反应体系的优化
1.2.1 不同 Mg2+浓度对 SRAP 扩增的影响
Mg2+通过调节 Taq 聚合酶的活性影响 PCR 扩
增结果，Mg2+浓度为 2.000 mmol/L、2.500 mmol/L
和 3.000 mmol/L 时条带较少、较弱且条带不清晰；
浓度为 1.500 mmol/L 时达到较好的扩增效果( 图 2)。
1.2.2 不同 dNTP 浓度对 SRAP 扩增的影响
比较了0.100 mmol/L、0.150 mmol/L、0.200 mmol/L、
0.250 mmol/L dNTP 浓度对扩增结果的影响，结果
表明：在各 dNTP 浓度下，都能扩增出条带，但 dNTP
浓度较低(0.100 mmol/L, 0.150 mmol/L) 时，扩增条
带少，且条带较弱。dNTP 浓度以 0.250 mmol/L 较
为适宜，条带稳定且清晰( 图 2)。
图 2 不同 Mg2+浓度、dNTP 浓度的 SRAP 扩增结果
注: M: 100 bp Plus DNA Ladder; 1~4: Mg 2+浓度分别为
1.500 mmol/L, 2.000 mmol/L, 2.500 mmol/L, 3.000 mmol/L ;
5~8: dNTPs 浓度分别为 0.100 mmol/L, 0.150 mmol/L,
0.200 mmol/L, 0.250 mmol/L, 每个处理重复 2 次
Figure 2 The amplification results of SRAP with different
concentrations of Mg2+ and dNTP
Note: M: 100 bp Plus DNA Ladder; 1~4: The Mg2+ concentrations
are 1.250 mmol/L, 1.875 mmol/L, 2.500 mmol/L, 3.125 mmol/L
respectively; 5~8: The dNTP concentrations are 0.100 mmol/L,
0.150 mmol/L, 0.200 mmol/L, 0.250 mmol/L, respectively,
with 2 replicates
1.2.3 不同引物浓度对 SRAP 扩增的影响
引物浓度对牡丹扩增结果影响也较大，在引物
浓度为 0.200 μmol/L 和 0.300 μmol/L 时扩增条带较
少且不清晰；在 0.400 μmol/L 时条带也较弱；在
0.500 μmol/L 时扩增效果最好( 图 3)。
1.2.4 不同模板 DNA 浓度对 SRAP 扩增的影响
模板 DNA 浓度不能太低，反应体系中模板
DNA 在 30 ng 时得不到有效扩增；在 60 ng 时条
带清晰，多态性高；而大于 90 ng 时条带反而较
弱( 图 3)。
图 3 不同引物浓度、模板 DNA 浓度的 SRAP 扩增结果
注: M: 100 bp Plus DNA Ladder; 1~4: 引物浓度分别为
0.200 μmol/L, 0.300 μmol/L, 0.400 μmol/L, 0.500 μmol/L;
5~8: 模板 DNA 浓度分别为 30 ng, 60 ng, 90 ng, 120 ng,
每个处理重复 2 次
Figure 3 The amplification results of SRAP with different
concentrations of primers and template DNA
Note: M: 100 bp Plus DNA Ladder; 1~4: The primers
concentrations are 0.200 μmol/L, 0.300 μmol/L, 0.400 μmol/L,
0.500 μmol/L respectively; 5~8: The template DNA concentrations
are 30 ng, 60 ng, 90 ng, 120 ng, respectively, with 2 replicates
1.2.5 不同 Taq 酶浓度对 SRAP 扩增的影响
在 20 μL 反应体系中，使用 0.500 U、1.000 U、
1.500 U、2.000 U 的 Taq DNA 聚合酶均能扩增出条
带，0.500 U 用量时扩增的条带较弱，而 1.500 U、
2.000 U 用量时非特异性扩增多，背景不清，1.000 U
的用量较好，条带清楚( 图 4)。
图 4 不同 Taq 酶浓度的 SRAP 扩增结果
注: M: 100 bp Plus DNA Ladder; 1~4 : Taq 酶浓度分别为
0.500 U, 1.000 U, 1.500 U, 2.000 U, 每个处理重复 2 次
Figure 4 The amplification results of SRAP with different
concentrations of Taq polymerase
Note: M: 100 bp Plus DNA Ladder; 1~4: The Taq Polymerase
concentrations are 0.500 U, 1.000 U, 1.500 U, 2.000 U,
respectively, with 2 replicates
分子植物育种
F
enzi Zhiwu Yuzhong