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分子植物育种
(
网络版
)
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online)
1002
缘关系研究
(
孟丽和郑国生
, 2004;
苏雪等
, 2006;
侯
小改等
, 2006)
、遗传多样性研究
(
龚洵等
, 2003;
杨
淑达等
, 2005; Yuan et al., 2012)
、指纹图谱构建
(
朱红
霞
, 2004)
及杂种鉴定
(Yuan et al., 2010;
索志立等
,
2004; 2005;
吴蕊等
, 2011;
王佳等
, 2006)
。
SRAP
标记已在观赏植物遗传多样性和遗传
图谱构建研究中得到广泛应用
,
如在石斛
(
樊洪泓
等
, 2006)
、石蒜
(
袁菊红等
, 2007)
、百合
(
陈琼等
,
2007)
、桂花
(
李梅等
, 2009)
、菊花
(
张飞等
, 2009;
Zhang et al., 2010)
、安祖花
(
于翠等
, 2012),
莲
(
杨美
等
, 2012)
中都有相关报道。目前
SRAP
已经应用于
牡丹品种的分类与杂交新品系鉴定
(Han et al.,
2008;
郝青等
, 2008)
。
本课题组已经以‘凤丹’为母本，配制了多种
的杂交组合，获得了不同的杂交群体，所以本实验
以‘凤丹’基因组
DNA
为模板，探讨
SRAP-PCR
反应体系中
5
种因素对扩增的影响，以期获得‘凤
丹’
SRAP
的最优反应体系，为今后课题组进行牡
丹连锁遗传图谱构建以及遗传多样性研究提供技
术支撑。
1
结果与分析
1.1
‘凤丹’
SRAP-PCR
反应体系的正交试验
‘凤丹’的
SRAP
反应体系中
5
因素
4
水平组
合的正交试验
(
表
1)
。优化后“凤丹”的
SRAP-PCR
反应体系扩增结果
(
图
1)
：其中组合
1
没有扩增出条
带；组合
2
、
5
、
6
、
8
、
9
、
10
、
13
、
15
扩增效果较
差，谱带弱且多态性低；组合
7
、
12
、
14
扩增出的
谱带多态性较高，但谱带强度和主带较差；组合
3
、
4
、
11
、
16
扩增的结果最好。所以我们进行单因子
试验优化体系：
0.500 U Taq
酶，
60 ng
模板
DNA,
3.000 mmol/LMg
2+
, 0.250 mmol/LdNTPs
，
0.400 μmol/L
引物
(
组合
16)
。
表
1
‘凤丹’
SRAP-PCR
反应体系的正交试验设计表
L
16
(4
5
)
Table 1 L
16
(4
5
) orthogonal design diagram for SRAP-PCR reaction system in
paeonia ostii
编号
Code
因素
Factors
Mg
2+
(mmol/L)
dNTPs (mmol/L)
Taq
DNA (U)
引物
(μmol/L)
Primers (μmol/L)
模板
DNA (ng)
Template DNA (ng)
1
1.500
0.100
0.500
0.200
30
2
1.500
0.150
1.000
0.300
60
3
1.500
0.200
1.500
0.400
90
4
1.500
0.250
2.000
0.500
120
5
2.000
0.100
1.000
0.400
120
6
2.000
0.150
0.500
0.500
90
7
2.000
0.200
2.000
0.200
60
8
2.000
0.250
1.500
0.300
30
9
2.500
0.100
1.500
0.500
60
10
2.500
0.150
2.000
0.400
30
11
2.500
0.200
0.500
0.300
120
12
2.500
0.250
1.000
0.200
90
13
3.000
0.100
2.000
0.300
90
14
3.000
0.150
1.500
0.200
120
15
3.000
0.200
1.000
0.500
30
16
3.000
0.250
0.500
0.400
60
分子植物育种
F
enzi Zhiwu Yuzhong