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刘景安等：富含多糖的野生西瓜果实
RNA
提取方法研究
1016
表
1 RNA
提取方案改进
Table 1 The modification of RNA extraction procedures
1/4
体积醋酸钠
1/4 volume of KAc
1/10
体积醋酸钠
1/10 volume of KAc
1/100
体积醋酸
1/100 volume of KAc
1/4
体积的无水乙醇
1/4 volume of ethanol
Ⅰ
Ⅲ
Ⅴ
1/10
体积的无水乙醇
1/10 volume of ethanol
Ⅱ
Ⅳ
Ⅵ
图
2 SDS
法提取野生西瓜果实
RNA
的改良措施
Figure 2 The modified measures of SDS for RNA extraction of
wild type watermelon fruit
要好
(
方法Ⅴ和Ⅵ
)
。
1.3
改良的
SDS
水饱和酚法提取总
RNA
效果的质
量检测及产率
由图
2
可看出，方法Ⅴ即加入
1/100
体积的醋
酸钾和
1/4
体积的无水乙醇是提取富含多糖的野生
西瓜果实
RNA
的较好方法。琼脂糖凝胶电泳的检
测结果表明该方法提取
RNA
完整性较好，电泳条
带清晰
(
图
2)
。该方法提取总
RNA
的
OD
260
/OD
280
值是
1.97
，
OD
260nm
/OD
230nm
比值为
1.91
。提取总
RNA
的产率为
15~20 μg
·
g
-1
·
FW
-1
。
2
讨论
很多植物的果实富含多糖，由于
RNA
许多理
化性质与多糖相似，因此沉淀
RNA
时会同时将多
糖沉淀。这就要求在
RNA
提取过程中首先应去除
多糖的干扰，但去除多糖的同时
RNA
也会被去掉，
造成产量的减少
(
李宏和王新力
, 1999)
。同时在沉淀
RNA
时，多糖会以凝胶状形式共沉淀，这种含有多
糖的
RNA
沉淀难溶于水，或溶解后产生黏稠状的
溶液，严重影响了
RNA
的纯度及后续的分子生物
学实验
(Fang et al., 1992)
。因此对于富含多糖的组
织，
RNA
提取过程中一个关键的问题是如何有效的
去除多糖，这也是本研究所要解决的一个关键问
题。野生西瓜与栽培西瓜相比虽然水溶性糖含量少
很多，但多糖类物质含量如果胶却比栽培西瓜多很
多。
SDS
水饱和酚法能有效的提取出栽培西瓜果实
总
RNA
，但却不适用于野生西瓜
PI296341-FR
。利
用该方法提取野生西瓜果实时，虽然经
PCI
抽提液
抽提后也能将水相、蛋白及有机相分开，但是在下
一步吸取水相液体时会因为水相非常黏稠而无法
正常吸取，强行吸取会带入大量的中间层蛋白及下
层有机相，导致
RNA
提取失败。这种黏稠现象直
观的表明野生西瓜富含有大量的多糖类物质。
目前关于
RNA
提取过程中去除多糖的报道已
有不少。菠萝果实富含多糖类物质，给
RNA
的提
取带来了不便，袁晓丽等
(2011)
通过对改良
SDS
法、
改良
CTAB
法和
Trizol
试剂盒法提取
RNA
的效果
的比较，得出改良
SDS
法的效果最佳。该方法的一
个关键步骤是加入
1/3
体积
5 mol/L KAc
溶液
(pH
4.8)
选择性沉淀多糖，本研究也曾做过类似尝试，
但提出的总
RNA
完全降解，其电泳图类似于图
1
，
表明该方法不适合本研究。栾福磊等
(2009)
人采取
加入低浓度乙醇
(10%~15%)
来去除多糖，明显降低
提取总
RNA
中多糖的含量。也有报道认为单纯低
浓度的乙醇并不能很好的沉淀多糖，还需要与其他
试剂相结合才可有效去除多糖
(
陈桂信等
, 2004)
，本
研究结果也支持这种观点。不少研究认为将醋酸钾
和无水乙醇共同使用，其去多糖效果会更明显
(
杜中
军等
, 2005)
。李映志等
(2009)
采用改良后的
CTAB
法成功提取出了菠萝蜜富含多糖组织中的
RNA
。作
者采取的一个关键步骤是采用无水乙醇和醋酸钾
预先将果胶多糖沉淀下来，以利于后续
RNA
提取，
虽然这也是本研究需要解决的关键问题，但参考其
无水乙醇和醋酸钾的用量并不能提取出完整的野
生西瓜果实总
RNA(
图
2
Ⅳ
)
，但却为进一步的尝试
提供了有益的借鉴。本实验经过多次尝试，最终筛
选出一种能成功提取出野生西瓜果实完整总
RNA
的方法
(
图
2
Ⅴ
)
。该方法明显与前人研究结果相比有
一个明显不同，即很少量的醋酸钾缓冲液
(
约
1/100
体积
)
即可有效去除大部分果胶，这个量是李映志等
(2009)
报道的醋酸钾缓冲液加入体积的十分之一；