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分子植物育种
(
网络版
)
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online)
1207
前需要对聚丙烯酰胺凝胶进行预电泳。预电泳后胶
孔中有尿素析出，上样前需要清除尿素；我们在以
前检测津田芜菁
(
Brassica rapa
'
Tsuda
') miRNA
的试
验中，发现聚丙烯酰胺凝胶极易破裂，所以转膜、
EB
染色拍照等过程中需要格外小心，但是仍然得
不到理想的实验结果；另外，丙烯酰胺单体是一种
神经毒剂，配制和使用溶液时也要特别小心。我们
尝试使用浓度为
4%
的琼脂糖凝胶来分离条带进行
Northern
检测，避免了聚丙烯酰胺凝胶的这些缺陷，
多次试验都取得了较为理想的结果。因此，我们认
为
4%
的琼脂糖凝胶结合地高辛标记的探针可以作
为一种更加安全方便的方法来进行津田芜菁
miRNA
的
Northern
检测。
1
结果与分析
1.1
总
RNA
提取结果
凝胶电泳结果显示，所有样品的总
RNA
均有
5S
、
18S
、
28S
三条带；
Nanodrop2000
分光光度计
测定后，浓度均在
2 μg•μL
-1
以上，
A260
与
A280
比
值均在
1.8
以上，浓度与纯度均符合实验要求。图
1
中字母
C
、
T1
、
T2
分别代表
Control
、
Treatment 1
和
Treatment 2
。
图
1
不同处理下津田芜菁幼苗总
RNA
提取
Figure 1 Total RNA extraction of turnip seedlings under
different treatments
1.2
电泳、切胶及转膜结果
30 μg RNA
样品在
100V
电压下、
4%
琼脂糖凝
胶中电泳约
1.5 h
后
(
图
2A)
，切除多余部分剩下包
含
10 bp~150 bp
区域的凝胶
(
图
2B)
，转膜完毕后在
紫外凝胶成像仪中照相，能观察到有极微量的残留
(
图
3)
，但总体来说转膜还比较彻底。
1.3 X
光片扫描、处理并计算灰度值
X
光片扫描结果如图
4
所示，与图
2B
比照之后，
内标
U6
条带在约
100 nt
处，
miRa1
条带在
20~30 nt
之间。图像经过处理、灰度扫描后的计算结果如图
5
所示。
图
2 RNA
样品在
4%
琼脂糖凝胶中电泳结果图
(A);
切除多
余部分的
4%
琼脂糖凝胶图
(B)
注
: M: 10 bp DNA Ladder
Figure 2 Electrophoresis of RNA samples in 4% agarose gel
(A); 4% agarose gel after removal of spare parts(B)
Note: M: 10 bp DNA ladder
图
3
转膜完毕后凝胶图
Figure 3 4% agarose gel after the process of gel transfer to
membrane
图
4 X
光片曝光、扫描、处理后得到的图片
Figure 4 X-ray film after exposure, scanning and disposal