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分子植物育种
(
网络版
), 2013
年
,
第
11
卷
,
第
1206
-
1210
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2013, Vol.11, 1206
-
1210
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
Copyright © 2013 5
th
Publisher 1206
技术主题
Technology Feature
一种更加安全的
Northern
印迹检测‘津田’芜菁中
microRNA
的方法
范鹏珍
,
周波
,
李玉花
东北林业大学生命科学学院
,
哈尔滨
, 150040
通讯作者：
bozhou2003@163.com
；
作者
分子植物育种
, 2013
年
,
第
11
卷
,
第
28
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2013.11.0028
这是一篇采用
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引用格式
(
中文
)
：
范鹏珍等
, 2013,
一种更加安全的
Northern
印迹检测‘津田’芜菁中
microRNA
的方法
,
分子植物育种
(online), 11(28): 1206-1210 (doi:
10.5376/mpb.cn.2013.11.0028)
引用格式
(
英文
)
：
Fan et al., 2013, A Safer Method for Northern Blot Analys is of MicroRNAs in Turnip
Brassica rapa
'Tsuda', Fenzi Zhiwu Yuzhong (online) (Molecular
Plant Breeding), 11(28): 1206-1210 (doi: 10.5376/mpb.cn.2013.11.0028)
摘
要
对于植物
microRNA
的
Northern
印记检测普遍使用变性聚丙烯酰胺凝胶和
32
P
标记的探针，但是该方法具有丙烯
酰胺和
32
P
的潜在危害。为了克服这些缺陷并建立一种更加安全的检测
microRNA
的
Northern
印记的方法，我们采用
4%
的
琼脂糖凝胶和地高辛标记的探针来分离和检测津田芜菁中的
microRNA
，最终成功地检测到了
microRNA
目的条带。这种方
法既能够避免丙烯酰胺和
32
P
对人体的潜在危害，又能够克服聚丙烯酰胺凝胶在溴化乙锭染色和转膜过程中极易破裂等缺陷，
还能够省去预电泳的步骤，更加安全省时、方便操作。
关键词
MicroRNA; Northern
印迹
;
琼脂糖凝胶
;
‘津田’芜菁
A Safer Method for Northern Blot Analysis of MicroRNAs in Turnip
Brassica
rapa
'
Tsuda
'
Fan Pengzhen , Zhou Bo , Li Yuhua
College of Life Sciences, Northeast Forestry Univers ity, Harbin, 150040, P.R. China
Corresponding author, bozhou2003@163.com;
Authors
Abstract
Denatured polyacrylamide gel and
32
P-labeled probes are generally used for northern blot analysis of plant
microRNAs, but it has the potential risks of acrylamide and
32
P. In order to overcome the disadvantages and establish a safer method
for microRNAs northern blot, we used 4% agarose gel and digoxigenin-labeled probes to separate and detect microRNAs in turnip
Brassica rapa
‘
Tsuda
’. Finally, the objective bands of microRNAs were detected successfully.
This method can not only avoid the
potential risks of acrylamide and
32
P, but also overcome the disadvantages that polyacrylamide gel is so fragile to get broken during
the process of gel transfer to membrane and ethidium bromide staining. In addition, agarose gel doesn’t need pre-electrophoresis.
This method is safer, more time-saving and convenient.
Keywords
MicroRNA; Northern blot; Agarose gel;
Brassica rapa
'
Tsuda
'
研究背景
MicroRNA(miRNA)
是一类长度为
20~24 nt
的
内源非编码小
RNA
，在植物生长发育以及抵抗胁
迫等过程中发挥着重要作用。
Northern
印记是检
测
miRNA
表达量的方法之一，也是发现并命名新
的
miRNA(novel miRNA)
的规则之一
(Ambros et
al., 2003)
。
目前，对
miRNA
的
Northern
检测普遍使用变
性聚丙烯酰胺凝胶电泳来分离条带。在探针的标记
方面，由于
miRNA
的丰度一般都很低，为保证良
好的信号强度和理想的实验结果，多数人选择使用
放射性标记的探针
(Luo et al., 2012; Pall et al., 2007;
Válóczi et al., 2004; Xia et al., 2012);
但从安全方面
考虑，也有少量文献中使用安全性较高的地高辛标
记的探针
(Bari et al., 2006; Zhang et al., 2011)
。
对
miRNA
进行
Northern
检测时，上样电泳之
收稿日期：
2013
年
09
月
02
日
接受日期：
2013
年
09
月
04
日
发表日期：
2013
年
10
月
26
日
基金项目：本研究由中央高校基本科研业务费专项资金
(DL11CA03)
资助