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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1383
-
1389
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1383
-
1389
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1385
表
1
总
RNA
紫外分光光度计检测值
Table1 Detection of total RNA quality by UV spectrophotometer
样品
OD
260
OD
280
OD
260
/OD
280
浓度
(µg/µL)
Sample
Concentration (µg/µL)
对照
0.351
0.185
1.900
1.404
CK
处理
0.346
0.186
1.860
1.384
Treatment
图
3
酶切效率电泳图
注
: D1
与
D2
分别为酶切前后的对照
, T1
与
T2
分别为酶切
前后的处理
; M: DL2000 marker
Figure 3 The efficiency s of mRNA digestion
Note: D1 and D2 are the Double strand cDNA of control
samples before and after digestion respectively; T1 and T2 are
the Double strand cDNA of treated samples before and after
digestion respectively; M: DL2000 marker
图
4
二次
PCR
产物电泳图
注
: E1:
差减第一次
PCR
产物
, 1
-
c:
未差减第一次
PCR
产物
,
pE1:
正向差减第二次
PCR
产物
; p1
-
c
：正向未差减第二次
PCR
产物
; M: DL2000 marker
Figure 4 Analysis of the second PCR product after SSH
Note: E1:first PCR product of forward subtracted cDNA; 1
-
c:
First PCR product of forward unsubtra-cted cDNA; pE1:
Second PCR product of forward subtracted cDNA; p1
-
c: econd
PCR product of forward unsubtracted cDNA; M: DL2000
marker
测序成功，去除低质量序列、小于
100 bp
序列以及冗
余序列后，得到
223
条单一序列。序列最短为
181 bp
，
最长
1 007 bp
，平均
509 bp
，绝大多数都集中在
300~
600 bp
之间，与
PCR
检测结果相一致。
经
Blast
分析，发现
223
条序列中
92
条为功能
已知序列，
53
条为未知功能序列，分别占全部基因
图
5
差减
cDNA
文库部分克隆的
PCR
检测
注
: M: DL2000 marker
Figure 5 The PCR detection of parts of cDNA reduction library
cloning
Note: M: DL2000 marker
的
41.26%
和
23.77%
。
23
条序列能够找到相似性较
高基因；
55
条序列未找到匹配基因，占到全部基因
的
24.66%
。为进一步了解文库中
ESTs
所涉及的生
命活动，结合本试验的研究目的，将所得全部
ESTs
具体分为八类，包括能量代谢、物质合成与代谢、
抗性、物质转运、细胞结构、信号转导、其他功能、
未知功能。按照基因在所得文库中所占的比例，绘
制饼状图
(
图
6)
。未知功能基因所占比例最大，占到
了全部基因的
47%
；物质合成代谢相关
ESTSS
在
功能已知基因序列中所占比列最大为
12%
，其中包
含与硝态氮代谢相关基因有硝酸还原酶、亚硝酸还
图
6
硝态氮诱导下
ERM
真菌差异表达基因功能分类图
Figure 6 Pie chart of molecular functional groups of differential
expressed gene in the subtractive cDNA library