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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1487-1492
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1487-1492
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1490
是诱导棉花体细胞胚胎发生的重要激素。
在棉花体细胞胚胎发生过程中，经过外植体初
期诱导分化形成的非胚性愈伤组织转化为胚性愈
伤组织是最为关键的。在本研究中，采用通用的培
养基
(2,4
-
D
和
KT
组合
)
在不进行其它调控的基础
上，经过
3~4
次的继代培养大铃棉和邯
8959
能够分
化形成胚性愈伤组织。这与目前应用较多的
YZ1
体
细胞胚胎发生时间基本相似
(
朱华国等
, 2012)
，但是
大铃棉和邯
8959
分别具有大铃和长绒、高比强等优
异性状。因此，在实际生产应用上大铃棉和邯
8959
明显优于棉花品系
YZ1
，同时也扩大了通过体细胞
胚胎发生途径再生的棉花基因型来源。
3
材料与方法
3.1
材料
10
个优异棉花品种
(
系
) (
表
2)
，由中国农科院棉
花研究所提供，这个
10
个棉花品种
(
系
)
在生产上具
有不同的优异性状。
3.2
棉花无菌苗的获得
种子经脱壳后，用
0.1% (W/V) HgCl2
溶液中消
毒
8 min
，用无菌水冲洗
3~4
次，然后接种于无菌苗
培养基
(MSB1)
上，于
(28±1)
℃下暗培养
5~7 d
左右得
到无菌苗。
3.3
棉花愈伤诱导和培养
将棉花无菌苗下胚轴分别切成
0.5 cm
左右的小
段，平放于诱导愈伤组织的培养基
(MSB2)
上，每个
材料接种
10
瓶
(
每瓶
10
个外植体
)
，
30 d
后统计愈伤组
织诱导率
(
诱导出愈伤组织的外植体数
/
接种的总外
植体数
)
，并将愈伤组织转移到愈伤增殖培养基上
(MSB3)
，每
3~4
周继代
1
次，并计算愈伤增殖率
(
一
定时间内单位重量的愈伤组织增长量，本实验中以
1 g
愈伤在
7 d
内的增长计算
)
，直至愈伤组织分化为
颜色淡黄、松散细小颗粒状的胚性愈伤组织。
3.4
棉花胚性愈伤组织的继代和萌发再生
将颜色淡黄松散细小颗粒状的、分化的胚性愈
伤组织转入
MSB4
培养基上，每
3~4
周继代
1
次，至胚
性愈伤萌发并出现完整的体细胞胚胎
(
子叶胚
)
。将完
全萌发的胚状体
(
子叶胚
)
转到再生培养基上
(MSB5)
，
对这些体细胞胚继续培养直至获得再生小苗。
本实验中所有培养基成分组成列于表
3
。所用
培养基添加
0.5% (W/V)
的琼脂粉，
pH
均为
5.8
，并以
121
℃高温、高压灭菌
12 min
。培养温度为
(28±1)
℃，
表
2
供试的
10
个棉花品种
(
系
)
及其优异性状
Table 2 10 cotton varieties (lines) and its excellent traits
编号
材料名称
优异性状
Series number
Material name
Excellent trait
1
冀
91
-
31
高比强
Jin91
-
31
High specific strength
2
沪
749513
长绒
,
高油份
Hu749513
Long staple, high oil content
3
大铃棉
大铃
Big boll cotton
Big boll
4
锦
444
综合性状好
Jin444
Good multiple characters
5
库车
T94
-
6
长绒
,
高比强
Kuche T94
-
6
Long staple, high specific strength
6
绵阳
73
-
39
高油份
Mianyang73
-
39
High oil content
7
苏
7036
远缘
中大铃
,
长绒
,
高比强
Su7036 Distant hybridization
Middle and big boll, long staple, high specific strength
8
荆
55263
耐黄萎病
,
大铃
,
高油份
Jing55263
Tolerance to verticillium wilt, big boll, high oil content
9
邯
8959
长绒
,
高比强
Han8959
Long staple, high specific strength
10
山农
6
号
耐黄萎病
Shannong6
Tolerance to verticillium wilt