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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1447
-
1457
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1447
-
1457
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1454
表
10
不同新原液比对供试水稻悬浮细胞生长的影响
Table 10 Effects of different fresh and culture fluid combination on the cell suspension growth of rice
新原液比
新液量
(mL)
原液量
(mL)
10 mL
净鲜重
(g)
10 mL
净干重
(g)
Proportion Fresh fluid volume (mL) Culture fluid volume (mL) Net fresh weight of 10 mL (g) Net dry weight of 10 mL (g)
2:1
40
20
0.230±0.001
0.015±0.0007
3:1
45
15
0.241±0.001
0.016±0.0006
4:1
48
12
0.214±0.001
0.014±0.0004
注
:
表
10
中使用的培养基是以基本培养基
N6
的大量元素
+
微量元素
+
有机成份为基本培养基
,
再添加
2 mg/L 2,4
-
D, 0.3 mg/L
水解酪蛋白
, 2.8 mg/L
脯氨酸和
30 g/L
蔗糖
, pH 5.8,
愈伤组织诱导温度
(28±1)
℃
Note: Medium used in figure 10 was supplemented with 2 mg/L 2,4
-
D, 0.3 mg/L casein hydrolysate, 2.8 mg/L proline and 30 g/L
sugar based on basic medium including the large elements of N6 medium plus trace elements and organic ingredients, pH 5.8,
induction temperature at (28±1)
℃
表
11
溶氧量对供试水稻悬浮细胞生长的影响
Table 11 Effects of dissolved oxygen on the rates of the cell suspension growth of rice
新原液比
接种量
(mL)
新液量
(mL)
原液量
(mL)
10 mL
净鲜重
(g)
10 mL
净干重
(g)
Proportion Inoculation (mL) Fresh fluid volume (mL) Culture fluid volume (mL)
Net fresh weight of Net dry weight of
10 mL (g)
10 mL (g)
2:1
10
7
3
0.188±0.009
0.011±0.004
20
13
7
0.407±0.015
0.176±0.007
30
20
10
0.130±0.006
0.010±0.003
注
:
表
11
中使用的培养基是以基本培养基
N6
的大量元素
+
微量元素
+
有机成份为基本培养基
,
再添加
2 mg/L 2,4
-
D, 0.3 mg/L
水解酪蛋白
, 2.8 mg/L
脯氨酸和
30 g/L
蔗糖
, pH 5.8,
愈伤组织诱导温度
(28±2)
℃
Note: Medium used in figure 11 was supplemented with 2 mg/L 2,4
-
D, 0.3 mg/L casein hydrolysate,2.8 mg/L proline and 30 g/L
sugar based on basic medium including the large elements of N6 medium plus trace elements and organic ingredients, pH 5.8,
induction temperature at (28±2)
℃
愈伤组织不褐化，其继代能力最强。所以，本研究中
适合供试水稻高频诱导愈伤组织且易于诱导出米
粒状、疏松和分散形态的愈伤组织的最适培养温度
在
28
℃左右，可见，
28
℃为水稻成熟胚来源诱导的
愈伤组织建立水稻悬浮培养技术的适宜温度。
不少研究表明，在水稻成熟胚愈伤组织诱导的
培养基中添加一些小分子有机营养物质如氨基酸
类，可显著提高其愈伤组织的诱导率以及增加其生
物量累积
(
胡燕梅等
, 2010;
李霞等
, 2005b)
。在本研究
中，在采用
N6
基本培养基为主要成分的愈伤组织诱导
中，附加一定浓度的激素组合，进一步添加
2.8 mg/L
脯氨酸和
0.3 mg/L
水解酪蛋白等有机营养物质，对
供试水稻愈伤组织诱导率的提高以及愈伤组织形
态的调控有明显的促进作用，
WT
和
PC
的均可提
高
2~3
倍的愈伤组织诱导率。
2.2
渐次降低继代培养的外源激素浓度是培养分散
和颗粒状水稻愈伤组织的关键
外源激素是调节水稻愈伤组织形态的重要手
段，但是不同水稻材料需要的激素水平不同。本研
究表明：虽然
2
个供试材料成熟胚愈伤组织诱导的
最适培养基成分不同，但在继代培养中，
2
个供试水
稻材料均在原有愈伤组织诱导培养基组分的基础
上，均逐渐降低
2,4
-
D
和
6
-
BA
浓度，均可诱导出
米粒状、疏松且生长迅速的愈伤组织，最终有利于
快速培养出生长旺盛且均匀的细胞团和单细胞层，建
立高效稳定的水稻悬浮细胞培养体系。而将
2
材料
的疏松的米粒状愈伤组织转移到液体培养基中的
生长，
2
材料对激素、新原液比以及溶氧量等则差异
不大，均在
42 d
即可诱导出分散和米粒状的水稻悬
浮细胞系。
2
材料悬浮细胞系的生长特征也差异不
大，生长周期均为
7 d
，接种至第
4 d
，悬浮细胞生
物量增加最快，不论是鲜重还是干重增加明显，其
生长最旺盛，到培养的第
4 d
时，生物量达到最大
值，而到第
6 d
生物量累积缓慢，干重增加放缓
(
王满
,
2011)
。因此，在继代培养基中，通过外源激素的降
低逐渐调节水稻愈伤组织的激素水平，均诱导出的