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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1447
-
1457
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1447
-
1457
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1453
表
9
不同
2,4
-
D
浓度对供试水稻悬浮细胞生长的影响
Table 9 Effects of different concentrations of 2,4
-
D on the rates of growth of rice cell suspensions
2,4-D
体积
(mL)
7 d
后净鲜重
(g)
7 d
后净干重
(g)
(mg/L)
Volume (mL)
Net fresh weight for a week (g)
Net dry weight for a week (g)
0.5
15
0.151±0.005
0.005±0.0002
1.0
15
0.312±0.010
0.007±0.0003
1.5
15
0.351±0.018
0.007±0.0003
2.0
15
0.459±0.020
0.009±0.0004
注
:
使用的培养基是以基本培养基
N6
的大量元素
+
微量元素
+
有机成份为基本培养基
,
添加
0.3 mg/L
水解酪蛋白
, 2.8 mg/L
脯
氨酸和
30 g/L
蔗糖
, pH 5.8,
愈伤组织诱导温度
(28±1)
℃
Note: Medium used in table 9 was supplemented with 0.3 mg/L casein hydrolysate, 2.8 mg/L proline and 30 g/L sugar based on basic
medium including the large elements of N6 medium plus trace elements and organic ingredients; pH 5.8, induction temperature at
(28±1)
℃
1.8
供试水稻悬浮细胞生长曲线的测定
根据本研究适宜的悬浮培养的培养条件，按
3:1
新原液量比例，将
20 mL
培养液接种到
100 mL
的
三角瓶中，在
28
℃下培养，用于测量悬浮细胞的生
长曲线，每隔
2 d
测量一次悬浮细胞的鲜重和干重，
共测定了
14 d
。图
2
显示了供试水稻悬浮细胞在
14
d
内的细胞培养物鲜重
(
图
2A)
和干重
(
图
2B)
生长变
化，
2
个供试材料的悬浮细胞干物质累积均呈单峰
曲线，接种开始至第
4 d
时，物质累积最快，是悬
浮细胞的旺盛生长期，第
4 d
达到峰值，之后干重
逐渐下降，生长缓慢，可见，该水稻悬浮细胞的生
长周期为
7 d
，而
PC
和
WT
的生长曲线表现类似。
2
讨论
2.1
水稻成熟胚诱导愈伤组织技术的建立是水稻稳
定高效悬浮细胞系建立前提
基因型的差异是水稻成熟胚愈伤组织培养力
差异的内在因素
(
阎丽娜等
, 2010)
。本研究表明，在
不同的培养基、琼脂和激素的调节下，
WT
的出愈
率始终要高于
PC
的，这与其种子的发芽率有一定
相关。
PC
的活力比
WT
的低，而且其成熟胚的出
愈率也低，可见，基因型的选择是其组织培养力的
发挥的重要因素，而选择新收获的发芽率较高水稻
种子也有利于愈伤组织的高频诱导。
培养温度是诱导植物愈伤组织关注的重要环
境条件，不同水稻材料成熟胚愈伤诱导所需的适宜
温度有差异，过高或者过低温度均适合其愈伤组织
的诱导和快速增加
(
吕孟雨等
, 2005)
。本研究表明：
当培养温度低于
25
℃时，水稻愈伤组织诱导率极低
图
2
水稻悬浮细胞生长曲线
Figure 2 The growth curve of embryogenic cell suspensions of rice
且愈伤组织生长缓慢，而大于
32
℃时，虽诱导率有
所提高，但是愈伤组织也加快生长，但是愈伤组织
多呈水渍、絮状和大颗粒，容易褐化，不利于继代。
只有
28
℃左右培养时，其不但愈伤组织的诱导率最
高，而且愈伤组织生物量增长也最快，尤其是其愈
伤组织的形态呈小颗粒状，分散且疏松，多次继代，