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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1408
-
1413
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1408
-
1413
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1410
表
1 7
个持家基因的标准曲线方程、回归系数及扩增效率
Table 1 Standard curve equation, regression coefficient and PCR efficiency of 7 housekeeping genes
基因
Gene names
标准曲线方程
Standard curve equation
斜率
Slope
扩增效率
(%)
PCR efficiency (%)
回归系数
Regression coefficient (R
2
)
ACT
Ⅱ
y=
-
3.4479
χ
+20.954
-
3.4479
95.00
0.995 9
CYP
y=
-
3.3164
χ
+19.098
-
3.3164
100.23
0.992 7
EIF 4B
y=
-
3.3735
χ
+21.988
-
3.3735
97.89
0.987 6
TUA
y=
-
2.3750
χ
+28.540
-
2.3750
163.67
0.952 7
TUB
y=
-
3.4594
χ
+19.428
-
3.4594
94.57
0.999 9
UBQ
y=
-
3.2147
χ
+16.130
-
3.2147
104.68
0.995 2
UBQL
y=
-
3.5896
χ
+20.044
-
3.5896
89.93
0.998 9
该程序默认值
V=0.15
，若
V
n/n+1
<0.15
，则没必要引
入第
n+1
个内参基因
(
刘莉铭等
, 2012;
王忠伟等
,
2012;
张玉喜等
, 2011)
。图
5
、图
6
可知，在盐胁迫
和对照条件下，
V
2/3
分别为
0.119
和
0.095
，均小于
0.15
，故无需引入第
3
个内参基因。结果表明，
107
杨在盐胁迫和对照条件下，叶片器官为材料进行的
基因表达分析内参基因最适数目是
2
个。
图
3
不同盐胁迫时间下持家基因的表达稳定性
Figure 3 Expression stability of the housekeeping genes in
various salt stress durations
2
讨论
Real time PCR
具灵敏、特异、精确、重复性等
优点，是研究基因表达方面的重要工具
(
李钱峰等
,
2008; Bustin, 2000)
。但通过
Real time PCR
进行基因
表达分析时，选择合适的持家基因作为内参基因是
获得可靠结果的关键因素。近年来，越来越多的实
验证明了持家基因的表达并非稳定
(Shen et al., 2010;
Mallona et al., 2010)
。因此，进行
Real time PCR
进
行基因表达分析时，需针对不同实验条件分析内参
图
4
对照条件下持家基因的表达稳定性
Figure 4 Expression stability of housekeeping genes in the
control condition
基因的表达稳定性。
本研究通过
geNorm
软件分析可看出，在盐胁
迫和对照条件下，
6
个持家基因表达稳定度分别为
EIF 4B=UBQ>CYP>ACT
Ⅱ
>UBQL>TUB
和
EIF 4B=
UBQL>ACT
Ⅱ
>CYP>UBQ>TUB
，结合
V
n/n+1
值，最
终确定
EIF 4B
和
UBQ
作为盐胁迫处理的内参基因，
EIF 4B
和
UBQL
作为对照条件下的内参基因。与
Brunner
等
(2004)
所报道的持家基因
UBQ
表达最为
稳定相符合，而其他持家基因稳定性不一致。本研
究中
TUA
持家基因的表达丰度与
Brunner
等
(2004)
报
道基本一致，但其扩增效率大大超出有效扩增范
围，故淘汰其后续的研究；
Jian
等
(2008)
以大豆为试
材，分析
TUA
持家基因在不同发育时期表达最稳定；
Brunner
等
(2004)
认为
TUA
持家基因表达是第二稳定
的。
EF1β
和
18S
持家基因在本实验中无法扩增出“
S
”
形曲线，无法进行后续研究。在早期研究中，常把