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分子植物育种(网络版), 2012 年, 第 10 卷, 第 1032-1037 页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1032-1037
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图7 BamHI和SacI酶切重组子pEASY-AhfatB电泳图谱
注: M: DNA marker DL2000; 1~2: 双酶切产物
Figure 7 Electrophoresis of the recombinant PEASY-AhfatB,
restriction enzyme digestion with BamHI and SacI
Note: M: DNA marker DL2000; 1~2: Recombinant cloned
vector digested product
图8 重组子PBI121-AhfatB的菌液电泳图谱
注: M: DNA marker DL2000; 1~2: 菌液PCR产物
Figure 8 Electrophoresis of recombinant PBI121-AhfatB
bacteria liquid
Note: M: DNA marker DL2000; 1~2: PCR product of bacteria
liquid
图9 重组子PBI121-AhfatB的Bam HI和SacI双酶切鉴定
注: M: DNA marker DL15000; 1: 酶切产物
Figure 9 Identification of the recombinant PBI121-AhfatB
restriction enzyme digestion with BamHI and SacI
Note: M: DNA marker DL15000; 1: Product of digesting
recombinant cloned vector
具有链的长度的特异性，不同的硫酯酶催化生成不
同碳链长度的脂肪酸。花生中16碳或18碳脂肪酸酰
基ACP 硫酯酶大量存在，其大部分脂肪酸为16碳或
18碳脂肪酸(Dehesh et al., 1996)，但在工业生产中，
碳链长度介于 6和 24 碳之间的脂肪酸，具有重要的
用途(Davies et al., 1991)。通过基因工程技术，如能
使中长链脂肪酸酰基 ACP 硫酯酶在花生中过量表
达，改变花生种子中脂肪酸组分，从而为工业生产
及人类生活做出贡献。
为了进一步分析花生中乙酰 ACP 硫酯酶基因
以及从转基因方面研究该基因的特性，本研究中我
们通过克隆得到了花生AhfatB 全长DNA序列、并分
析了花生中AhfatB序列与其他作物中该基因序列的
同源性，有助于我们进一步研究该基因的起源及同
源特性。通过替换载体 PBI121上的GUS基因，构建
了表达载体 PBI121-AhfatB ，为下一步进行基因转化
做好前期准备。
综上所述，从基因角度来进行花生品种的改
良，还需要我们进行大量的基因方面的研究以及转
基因方面的工作，本研究只是构建好了植物表达载
体，但对于AhfatB转入受体植物后会有怎样的效果，
还需要进一步工作及研究。
3 材料和方法
3.1 材料
花生( Arachis hypogaea L.) 栽培品种山花7 号，
由山东农业大学花生研究所提供。
植物总RNA提取剂、 TapDNA聚合酶、反转录
试剂盒、克隆载体 pEASY-T1 均购自 TransGen
Biontech； T 4DNA连接酶、限制性内切酶Bam HI和
Sac I购自宝生物科技有限公司；DNA回收试剂盒和
质粒提取试剂盒购自天根生化科技有限公司；表达
载体质粒pBI121 由山东农业大学生命科学学院郑
成超教授惠赠；引物合成由上海生工生物服务公司
完成；目的片段测序由华大基因科技公司完成。
3.2引物合成
根据GenBank公布的花生中的AhfatB序列( 登录
号 : EF117305) ，设计 4 条引物 AhfatB-1 ： 5′-CG
GGATCC CGTCGTCTTCTGCTTACT-3′( 下划线处
为 BamHI 酶切位点) 、 AhfatB-2 ：5′- GC GAGCTC
CTACTTTCCCCACCTT AC-3′( 下划线处为 SacI酶
切位点 ) 、 AhfatB -3 ： 5′- TCCCTGTTCCTTCACC
T-3′ 、 AhfatB-4: 5′- AGCCTCCTTGTT AGT TT
ATTCA-3′ 引物由上海生工生物工程技术服务有限
公司合成。