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分子植物育种(网络版), 2012 年, 第 10 卷, 第 1214- 1217 页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1214- 1217
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行分析是判断 RNA 质量的一种重要方法，通过对
18S 和 28S 条带的完整性可判断 RNA 有无降解及
降解程度(王英等, 2009)。从 RNA 琼脂糖凝胶电泳
图可见，利用天根的 RNAplant plus Reagent 试剂盒
未能提取盐胁迫处理后的 107 杨叶片组织总 RNA
(图 1A)，提取根组织的 RNA 也已大部分降解(图
1B)；采用天泽柱式植物 RNAout 在叶和根组织中都
提取获得了总 RNA，但 RNA 浓度较低，需提取大
量组织材料方可用于后续实验；改良的 SDS 方法提
取效率和质量最佳，28S 与 18S 条带亮度约为 1.5:1。
这 3 种提取 RNA 方法都存在 DNA 污染，因此，后
续实验中需 DNA 酶进行处理解决。
图 1 不同方法提取 107 杨叶片和根总 RNA 电泳图谱
注: 1, 6: RNAplant plus Reagent 提取叶和根总 RNA; 2, 5: 柱
式植物 RNAout; 3, 4: 改良 SDS 法分别提取叶和根总 RNA
Figure 1 Agarose electrophoresis of total RNA extracted from
leaf and root of poplar 107 by using different methods
Note: 1, 6: Total RNA extracted from leaf and root of poplar
107 by using modified RNAplant plus Reagent method; 2, 5:
Total RNA extracted from the same above by using column
RNAout method; 3, 4: Total RNA extracted from the same
above by using modified SDS method
1.2 RNA 纯度和浓度
RNA 溶液在 230 nm、260 nm、280 nm 的光密
度分别代表杂质(多肽, 酚, 糖等 )和蛋白等有机物
的吸收植。纯 RNA 的 OD260/OD 280 值在 1.8~2.1 之
间，小于 1.8 表明蛋白或其他有机物污染，大于 2.1
表明 RNA 已经降解；OD 260/OD230 值＜2.0，表明溶
液中有残存的盐和小分子杂质，如核苷酸、氨基酸、
酚等。利用 NanoDrop ND-1000 微量紫外可见分光
光 度 计 测 量 RNA 样 品 的 OD260/OD 280 和
OD260/OD 230 比值(表 1)，采用改良 SDS 法和柱式植
物 RNAout 试剂盒得到的 OD 260/OD280 和比值为
1.8~2.1，符合标准的比值，纯度较高。
1.3 RNA 样品的 cDNA 合成及质量检测
利用 3 种方法提取的 RNA 作为模板进行反转
录，将合成的 cDNA 进行 PCR 扩增，以检测 RNA
的质量。RT-PCR 电泳结果如图 2 所示，改良 SDS
法所提取的 RNA 经反转录后，可扩增出目的条带；
柱式 RNAout 法提取根 RNA 可扩增出目的条带，
但条带微弱；RNAplant plus Reagent 法所提取的
RNA 未能扩增出条带，与其所提的 RNA 质量有关。
图 2 杨树 UBQ 基因的 RT-PCR 产物
注: 1~3: 分别为改良 SDS 法, 天根 RNAplant plus Reagent 试
剂盒和天泽柱式植物 RNAout 提取叶片总 RNA 的反转录产物;
4~6: 分别为改良 SDS 法, 天根 RNAplant plus Reagent 试剂盒
和天泽柱式植物 RNAout 提取根总 RNA 的反转录产物
Figure 2 RT-PCR products of poplar UBQ gene
Note: 1~3: RT-PCR products of total RNA from leaf isolated
with modified SDS method, RNAplant plus Reagent and
column RNAout; 4~6: RT-PCR products of total RNA from
root isolated with modified SDS method, RNAplant plus
Reagent and column RNAout
2 讨论
目前，对于木本植物不同种、不同部位 RNA
的提取，研究人员已总结出不同的方法，但在实际
操作过程中，用同一套提取方法不能保证获得同样
的效果。如柱式 RNAout 法提取叶片和根中 RNA ，
将所获得的 RNA 反转录后进行 PCR，在叶中不能
扩增出目的条带，而在根中扩增出了微弱条带。
杨树受盐胁迫后，会产生大量的次生代谢物，
当细胞裂解后就会释放出来，并与多酚氧化酶反应
成褐色，其氧化生成多元琨类物质与 RNA 发生不
可逆结合，导致 RNA 降解、丢失、难溶解(郭丽霞
等, 2007; 肖洁凝等, 2003)。在提取液中加入高浓度
的 β-巯基乙醇可以防止酚类物质被氧化及其与
RNA 结合。本试验在提取缓冲液中加入 5%的 β -
巯基乙醇防止酚类物质氧化。
植物在短时间内受盐胁迫后，会产生大量的多
糖，而多糖的存在则是 RNA 提取一大障碍，因为
多糖的结构与 RNA 相似，去除多糖的过程中，RNA
也将同时被去除，减少 RNA 产量；另外，含有多
糖的 RNA 沉淀难溶于水，而且多糖可抑制酶活，