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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1214
-
1217
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1214
-
1217
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1214
技术主题
Upgraded Feature
盐胁迫处理的杨树
RNA
提取方法研究
周祥明
,
宋建
,
王姝
,
郝志愚
天津市农业生物技术研究中心
,
天津
, 300384
通讯作者
:
mittonzhou@163.com
作者
分子植物育种
, 2012
年
,
第
10
卷
,
第
30
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.0030
收稿日期：
2012
年
04
月
24
日
接受日期：
2012
年
05
月
04
日
发表日期：
2012
年
06
月
18
日
这是一篇采用
Creative Commons Attribution License
进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用
,
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件的使用与传播。
引用格式
(
中文
)
：
周祥明等
, 2012,
盐胁迫处理的杨树
RNA
提取方法研究
,
分子植物育种
(online) Vol.10 No.30 pp.1214-1217 (doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.0030)
引用格式
(
英文
)
：
Zhou et al., 2012, Study on the Extraction Methods of Total RNA from Salt Stressed Poplar, Fenzi Zhiwu Yuzhong (online) (Molecular Plant Breeding)
Vol.10 No.30 pp.1214-1217(doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.0030)
摘
要
本研究以盐胁迫下的
107
杨叶片和根为材料，利用紫外分光光度计和凝胶电泳比较改良
SDS
法、柱式植物
RNAout
和
RNAplant plus Reagent
试剂盒提取总
RNA
的质量。结果表明：不同提取方法对实验结果影响很大，其中改良
SDS
法提取
的
RNA
质量和产率均较理想，叶和根总
RNA
的
OD
260nm
/OD
280nm
比值分别为
2.06
和
1.83
，
OD
260nm
/OD
230nm
比值均大于
2.0
；
28S rRNA
和
18S rRNA
条带清晰，无降解；产率分别为
81.9 µg/g
和
30.3 µg/g
。
RT-PCR
可特异扩增出目标片段，说明改良
SDS
法提取的总
RNA
可直接用于后续分子生物学试验。
关键词
盐胁迫；
RNA
提取；杨树；
RT-PCR
Study on the Extraction Methods of Total RNA from Salt Stressed Poplar
Zhou Xiangming , Song Jian , Wang Shu , Hao Zhiyu
Tianjin Research Center for Agricultural Biotechnology, Tianjin, 300384
Corresponding author, mittonzhou@163.com;
Authors
Abstract
Modified SDS method, Column Plant RNAout and RNAplant plus Reagent kits were compared in extracting total RNA
from salt stressed poplar 107 with gel electrophoresis and UV-Spectrometer. The results showed that different RNA extraction
methods greatly affected the experimental results. Desirable yield and quality RNA can be isolated with modified SDS method, and
the OD
260
/OD
280
ratios of the RNA from leaf and root are 2.06 and 1.83 respectively. Moreover, the OD
260nm
/OD
230nm
ratios of both
are above 2.0. The bands of 28S rRNA and 18S rRNA are clear and did not degrade, and the yields of RNA from leaf and root are
81.9 µg/g FW and 30.3 µg/g FW respectively. The specific target fragments were amplified with RT-PCR method. This demonstrates
that RNA isolated by this method could be used for further study on related molecular biological experiments.
Keywords
Salt stress; RNA extraction; Poplar; RT-PCR
研究背景
高质量的
RNA
提取成功与否是进行分子生物
学研究的前提和基础。目前，许多分子生物学研究，
如基因表达分析、基因克隆、
cDNA
文库构建及转
录组测序等都需要高质量的
RNA
。杨树具有基因组
小、遗传多样性丰富、遗传转化系统简单且无性繁
殖容易等优点，已成为林木基因组研究的模式植物
(
程强等
, 2009)
。杨树在盐胁迫条件下产生大量的多
糖及次生代谢物，严重影响了
RNA
提取的质量和
得率。目前已报道多种成功提取植物
RNA
的方法
(
林清芳等
, 2011;
张倩茜等
, 2011;
余发新等
, 2010;
赵百慧等
, 2010;
林莎等
, 2008)
，但由于不同植物及
相同植物的不同生理时期的物质组成千差万别，因
此，
RNA
提取方法也不尽相同。本研究以盐胁迫处
理后的杨树叶片和根为材料，通过对天泽植物
RNAout
试剂盒、天根
RNAplant plus Reagent
试剂
盒和改良的
SDS
法提取总
RNA
，通过
RNA
纯度、
凝胶电泳及反转录分析等途径确定适于盐胁迫后
的杨树总
RNA
提取方法，为后续的基因表达研究
奠定基础。
1
结果与分析
1.1 3
种提取
RNA
方法的比较
采用凝胶电泳手段对所获得的植物总
RNA
进