Basic HTML Version
分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1191
-
1198
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1191
-
1198
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1194
图
5
Taq
DNA
聚合酶浓度试验结果
注
: M: DL2000 marker, 1~4
泳道的引物浓度分别为
: 0.5 U,
1.0 U, 1.5 U
和
2.0 U
Figure 5 Result of
Taq
polymerase concentration
Note: M: DL2000 marker, 1~4 Taq polymerase: 0.5 U, 1.0 U,
1.5 U and 2.0 U
板
DNA
和
Taq
DNA
聚合酶对
PCR
扩增效果影响
的反复实验、比较分析和筛选优化，摸索出了一套
适于云南小麦断穗与抗条锈病
SSR
标记反应的最佳
PCR
反应体系，即在总体积
25 μL
的反应体系中，以
Mg
2+
1.8 mmol/L
、
dNTP 0.25 mmol/L
、引物
0.1 μmol/L
、
模板
DNA 30 ng
和
Taq
DNA 1.5 U
为最佳浓度或用
量。其扩增程序为：
94
℃预变性
3 min
，
44
个循环
按照
94
℃变性
1 min
、复性
1 min
、
72
℃延伸
2 min
进行，最后
72
℃延伸
10 min
。扩增结束后，采用
2%
的琼脂糖凝胶进行电泳，以确定利用该体系进行
云南小麦抗条锈病和断穗基因的
SSR
反应是否能
达到理想的扩增效果。为此，我们用与抗条锈病基
因连锁的
SSR
引物
Xgwm582
和与断穗基因连锁的
Xgwm161
，分别对
37
份云南小麦和山羊草、野生
一粒和乌拉尔图小麦等共
47
份不同的实验材料进
行了扩增效果检验。扩增结果表明，在该体系下两
对引物都分别在
47
份材料中扩增出了清晰、强弱
明显的
DNA
条带
(
图
6
和图
7)
，这说明利用该体系
开展云南小麦抗条锈病和断穗基因的
SSR
标记研
究是合适的和有效的。
2
讨论
SSR
标记虽然作为遗传多样性、物种起源、品
种指纹图谱构建或个体识别和遗传辅助育种等研
究的工具或技术手段已是公认的和理想的，但是如
果在
PCR
反应体系中使用了不适宜的
Taq
聚合酶、
Mg
2+
、
dNTP
、模板
DNA
和引物等成分的浓度或用
量会使扩增物放大或缩小对它们的敏感性和特异
性。就这些成分的单独影响而言，
Mg
2+
浓度与
Taq
聚合酶活性有关，它在过低时会显著降低后者的活
力，反之则又会使非特异产物增多，以致无法鉴别
图
6
抗病引物
Xgwm582
在
47
份小麦材料中的
PCR
扩增
注
:
上排
1~23
和下排
1~24
泳道模板
DNA
为
47
个不同小麦材料的基因组
DNA; M: DL2000 marker
Figure 6 PCR amplification by resistance stripe rusl primer Xgwm582 among 47 wheat accessions
Note: Upper 1~23 and lower 1~24 is 47 wheat accessions DNA; M: DL2000 marker