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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1179
-
1184
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1179
-
1184
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1181
凝胶染色效果好、本底浅，各点分离清晰，无明显
横向或纵向拖尾，能满足双向电泳软件分析的需要，
从图中
(
图
3
所示
)
可以看出分泌蛋白在
116.0 kD~
14.4 kD
之间均有分布，主要集中在
80.0 kD~30.0 kD
，
蛋白
PI
从
5~6
广泛存在，用
PDQuest7.4
图像分析
软件构建了分泌蛋白质组匹配差异图谱，其中在全
氮培养条件下菌株分泌蛋白质组图谱上检测到平
均
238
个蛋白点，在氮饥饿条件下菌株分泌蛋白电
泳图谱上检测到平均
173
个蛋白点，两者均有表达
的蛋白质点有
139
个，分别占各自的
80%
和
58%
，
其中差异显著
51
个
(
其中氮饥饿诱导下蛋白表达量
相对于全氮培养下上调的有
22
个
,
下调的有
29
个
)
，在全氮培养下表达的有
99
个，在氮饥饿下表
达的有
34
个
(
表
1)
所示，由此可看出两处理间蛋白
表达的数量和表达量存在差异，可用于差异分析。
1.3
差异表达蛋白的质谱鉴定
从
Y98
-
16
菌株在全氮培养与氮饥饿诱导下显
著差异表达的分泌蛋白中随机挖取蛋白点
30
个，
鉴定了
26
个蛋白质点，图
3
中标出了这些差异点
的位置。根据
Gene ontology
程序对每个鉴定的蛋白
质功能进行了分类，分析结果见表
2
。在被鉴定的
26
个蛋白质点中，除去
6
个功能未知或不明确的蛋
白质外，共有
20
个有功能描述的蛋白质，这些蛋
白点大部分含有信号肽，只有极少数不含信号肽，
可能是通过其它非典型分泌途径分泌的
(
结果见
表
2)
。通过对差异点的质谱鉴定及其功能分类可以
得出这些蛋白功能涉及代谢、催化、应激、发育、
防御
/
抗胁迫、细胞分裂等过程。
1.4
被鉴定蛋白的功能分析
Y98
-
16
菌株在氮饥饿诱导下特异表达的分泌
蛋白有
9
号
(gi|145602874)
丝氨酸羧肽酶
S28
，属于
图
3
稻瘟病菌
Y98
-
16
分泌蛋白的
2
-
DE
图谱
注
: A:
全氮培养
; B:
氮饥饿处理
Figure 3 Maps for secreted protein Y98
-
16 by dyeing
coomassie brilliant blue at the condition of complete medium
and nitrogen starvation medium
Note: A: Cultured by Complete medium; B: Nitrogen Starva-
tion medium
α/β
水解酶家族成员之一，对丝氨酸羧肽酶类蛋白
的功能研究表明，
SCPL
基因在参与种子萌发中储
藏蛋白的水解、细胞程序性死亡中细胞成分的自
溶、种子发育、抗逆境等诸多过程中起作用；
27
号
(gi|39974523)
糖基水解酶家族
16
，属于葡聚糖酶超
表
1 Y98
-
16
在全氮培养与氮饥饿条件下的分泌蛋白表达差异比较
Table 1 Comparison of secreted proteins from Y98-16 at the condition of complete medium and nitrogen starvation
胶名称
蛋白点
匹配
共同表达的点
匹配率
1 (%)
匹配率
2 (%)
显著差异
a
上调
下调
特异表达
Gel Name Spots
Matched Co-expression Match Rate 1
(%)
Match Rate 2
(%)
Difference
significant
Up
regulation
Down
regulation
Specific
expression
16t+N
238
139
139
80
58
51
22
29
99
16t-N
*
173
173
100
100
34
注
: *:
参考胶
; 16t+N: Y98
-
16
菌株在全氮培养条件下的分泌蛋白
; 16t
-
N: Y98
-
16
菌株在氮饥饿诱导下的分泌蛋白
; a:
选取不
同条件下菌株表达量比值大于
2 (
上调
)
或者小于
0.5 (
下调
)
的为显著差异
Notes:*: master gel; 16t+N: Secreted Protein from Y98
-
16 strainsat the condition of nitrogen satiation; 16t-N: Secreted Protein from
Y98
-
16 strains at the condition of nitrogen starvation; a: Expression quantity ratio greater than 2 (up regulation) or less than 0.5
(down regulation) are chosen as significant differences