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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1133
-
1137
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1133
-
1137
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1134
两种试材进行了平行浸花实验，多次实验证明在拟
南芥中可以获得转化株，而白菜中未能获得。之后
采用细菌平板培养的方法对浸花后的两种材料花器
官中的农杆菌活力大小进行了比较分析。实验结果
对探索白菜的浸花转化方法提供了一些理论依据。
1
结果分析
1.1
浸花处理后的白菜和拟南芥
T
1
代种子抗性筛选
结果
使用
Basta
®
对浸花材料的
T
1
代种子进行抗性
筛选，
ppt
筛选压为
0.225 g/L
。本实验共对拟南芥
和不结球白菜“引心
360
”各
15
株进行了浸花实验，
浸花后两种实验材料结籽情况良好。考虑到拟南芥
的种子细小，难以对结籽数进行统计，本实验对两
种实验材料进行了株转化率的比较。
T
1
代种子筛选
结果中，拟南芥得到除草剂
Basta
抗性株
3
棵，“引
心
360
”未获得抗性株
(
表
1)
。
1.2 GUS
外源基因表达检测结果
对经
Basta
筛选获得的拟南芥抗性植株的叶片
和幼嫩茎杆进行
GUS
基因表达稳定性检测，得出
在抗性植株的叶片和茎杆中组织化学染色结果均
显阳性。研究结果初步表明：外源基因已导入拟南
芥基因组
(
图
1)
。
图
1
抗性植株
GUS
检测
注
:
左为非转化拟南芥对照
,
右为
Basta®
筛选出的
T
1
代抗
性株
Figure 1 GUS assay of the Basta resistant plant
Note: Non-transformed plant (left), putative transformed plant
(right)
1.3
拟南芥和白菜花器官中农杆菌数的定量分析
多次的浸花实验筛选结果表明，拟南芥较容易
得到转化株，而多个白菜品种
(
“四九菜心”
,
“引
心
360
”和“引心
400
”
)
经转化均未获得转化株。
这说明目前利用浸花技术对白菜进行转化存在一
定的困难。
本实验采用细菌平板培养菌落计数法，对拟南
芥和不结球白菜“引心
360
”两种材料花器官中存
活的农杆菌数量差异大小进行了调查。该结果在一
定程度上解释了拟南芥和白菜转化存在差异的原因。
1.3.1
花蕾提取液中培养出的菌落验证结果
菌落鉴定的目的是为了验证实验材料花器官
内培养出的细菌是否为转化所用的工程菌。
1.3.1.1
菌落形态鉴定
将浸花处理后的拟南芥花器官提取液涂板，筛
选平板培养出的菌落外表光滑呈圆形，凸起发亮，
符合农杆菌的菌落特征
(
徐恒戬等
, 2005)
。非转基因
拟南芥花蕾提取液则没有培养出菌落
(
图
2)
。
1.3.1.2
菌落抗性鉴定
培养基中的卡那霉素已经对平板上形成的菌落
进行了初步的筛选。鉴于转化所用的工程菌同时还
对利福霉素有抗性，因此可以用含有利福霉素的液
图
2
农杆菌培养平板
注
:
左为拟南芥花器官中的农杆菌在筛选平板上培养
5 d
后
的结果，右为非转基因拟南芥花蕾提取液
Figure 2 The cultureof
A. tumefaciens
Note:
A. tumefaciens
cultured for 5 days from floral dipped
Arabidopsis thaliana
(left), and CK (right)
表
1
拟南芥和引心
360
浸花法的转化率比较
Table 1 The transgenic rates in
Arabidopsis thaliana
and pak choi
材料名称
处理株数
(
株
)
转化株数
(
株
)
株转化率
(%)
Species
Numbers of floral-dipped plants
Numbers of transformed plants Plant transformation frequency (%)
拟南芥
15
3
20
Arabidopsis thaliana
引心
360
15
0
0
Pak-choi Yinxin360