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分子植物育种
(
网络版
), 2012
年
,
第
10
卷
,
第
1133
-
1137
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1133
-
1137
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
1133
研究报告
A Letter
浸花转化技术中不结球白菜与拟南芥的比较研究
韩笑
1,2
,
曲志才
1
,
陆坤
2
,
王桂香
2
,
刘凡
2
1
曲阜师范大学生命科学学院
,
济宁
, 273165
2
北京农林科学院蔬菜研究中心
,
北京
, 100097
通讯作者
:
liufan@nercv.org
作者
分子植物育种
, 2012
年
,
第
10
卷
,
第
18
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.0018
收稿日期：
2012
年
03
月
14
日
接受日期：
2013
年
04
月
09
日
发表日期：
2012
年
05
月
15
日
这是一篇采用
Creative Commons Attribution License
进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用
,
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引用格式
(
中文
)
：
韩笑等
, 2012,
浸花转化技术中不结球白菜与拟南芥的比较研究
,
分子植物育种
(online) Vol.10 No.18 pp.1133-1137 (doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.
0018)
引用格式
(
英文
)
：
Han et al., 2012, A Comparative Study of the Floral-dip Technique in Pak choi (
Brassica campestrisssp
.
Chinensis
L.) and
Arabidopsis thaliana
, Fenzi Zhiwu
Yuzhong (online) (Molecular Plant Breeding) Vol.10 No.18 pp.1133-1137 (doi: 10.5376/mpb.cn.2012.10.0018)
摘
要
为了探索建立白菜的浸花转化技术，并阐释其转化率低的原因，本研究以拟南芥为对照，平行开展了二者的浸花
转化研究。处理植株收获种子采用含
0.225 g/Lppt
的
Basta
溶液喷施，拟南芥中获得了抗性株，其植株转化率为
20%
，白菜
中没有获得抗性株。
GUS
检测进一步证明了拟南芥抗性株中外源基因的表达。以浸花处理后的拟南芥和白菜为材料，采用
细菌平板培养的方法比较研究了这两种植物花器官内农杆菌的数量差异。研究结果表明，在同样的处理条件下，自拟南芥花
蕾提取物中培养出一定数量的农杆菌菌落单元，然而白菜花蕾提取液中没有出现菌落单元。这说明农杆菌很难通过浸花处理
进入白菜花器官内，在一定程度上解释了为何白菜的转化频率远远低于拟南芥。
关键词
白菜
;
拟南芥
;
浸花转化法
;
农杆菌
;
比较研究
A Comparative Study of the Floral-dip Technique in Pak choi (
Brassica
campestrisssp. Chinensis
L.) and
Arabidopsis thaliana
Han Xiao
1,2
, Qu Zhicai
1
, Lu Kun
2
, Wang Guixiang
2
, Liu Fan
2
1. College of Life Science, Qufu Normal University, Qufu, 273165, P.R. China
2. Beijing Vegetable Research Center, Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences, Beijing, 100097, P.R. China
Corresponding author, liufan@nercv.org;
Authors
Abstract
In order to apply the floral-dip technique into Chinese cabbage and explain why it is difficult to succeed in Chinese
cabbage, a parallel study of pak choi floral-dip transformation and
Arabidopsis thalina
floral-dip transformation was taken.
Harvested seeds from both dipped flowers were sowed, and seedlings were sprayed by Basta solution containing 0.225 g/L PPT.
Herbicide resistant plants were screened from the
Arabidopsis thaliana
plants, and the plant transformation rate is about 20%, but no
resistant plant was got from the pakchoi plants. The GUS staining further proved the expression of the exogenous genes in
Arabidopsis thaliana
. The existence of the
Agrobacterium
in the flowers of these two species and its viability differences between
themwere investigated with bacterial plating method. Results showed that there were lots of
Agrobacterium
clones cultured from the
extract of Arabidopsis thalaina flower buds, while no
Agrobacterium
was cultured from the extract of the pakchoi flower buds. This
suggests that it is difficult for
Agrobacterium
to enter the flower buds of pakchoi, and to some extent this might explain why the
transformation rate in pak choi is far lower than that in
Arabidopsis thaliana
.
Keywords
Pak choi;
Arabidopsis thaliana
; floral-dip;
Agrobacterium tumefaciens
; Comparison research
研究背景
农杆菌介导的
floral-dip
转化方法是近年发展
起来的一种较简便的非组织培养转基因方法
(
韦献
雅等
, 2006)
。该方法最大的优点在于可以直接获得
转化的种子，避开了组织培养和继代培养，相对于
真空转化也拥有对仪器设备要求较低，适用于大型
植株等优势。该方法首先在拟南芥中获得了成功，
在甘蓝型油菜等植物上也已经有成功转化的报道
(
徐光硕等
, 2004)
。然而该方法在白菜中还未见有成
功转化的例子。初步研究发现，拟南芥原位转化中，
农杆菌的转化目标是雌性生殖细胞，在白菜中也可
能遵循同样的规律。本实验对不结球白菜和拟南芥