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分子植物育种(网络版), 2012 年, 第 10 卷, 第 1080- 1086 页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2012, Vol.10, 1080- 1086
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图 9 部分引物组合扩增结果
注: M: DNAMarker DS TM 5000; 1~3: 模板分别为青芋 1 号, 青芋 2 号, 青芋 3 号; A~H: me1 -em3, me1-em4, me1-em5, me1-em7,
me1- em8, me1- em10, me2-em1, me2 -em2
Figure 9 Amplification results of part primer combinations
Note: M: DNA Marker DSTM 5000; 1~3: DNA were Qingyu1, Qingyu2, Qingyu3; A~H: primer pairs were me1- em3, me1- em4,
me1- em5, me1- em7, me1- em8, me1- em10, me2-em1, me2 -em2 respectively
海省农林科学院园艺所菊芋资源圃。相关菊芋种质
资源材料见表 1 。
3.2 试剂
110 对 SRAP 引物参考 Li 等提出的原则设计合
成，具体序列见表 2，由南京金斯瑞生物科技有限
公司合成。Taq DNA 聚合酶及 dNTPs 购自北京全
式金生物技术有限公司，DNA Marker 购自广州东
盛生物科技有限公司。
3.3 DNA 提取
在研钵中加入少许石英砂和少许 PVP 干粉研
磨 30 mg 硅胶干燥的菊芋叶片，迅速移入装有已
65℃预热的 700 μL 2 ×CTAB 提取液(100 mmol/L
Tris-HCl PH8.0, 20 mmol/L EDTA, 1.4 mol/L NaCl,
2% CTAB, 使用前加入 0.5% β-巯基乙醇)的 1.5 ml
表 1 供试菊芋种质资源的名称及来源
Table 1 List of varieties and origin of Jerusalem artichoke
编号 名称 来源 编号 名称 来源
Number Name Origin Number Name Origin
1 青芋 1 号 北京 8 W43 河南
Qingyu 1 Beijing Henan
2 青芋 2 号 山东 9 W50 湖南
Qingyu 2 Shandong Hunan
3 青芋 3 号 青海 10 W54 加拿大
Qingyu 3 Qinghai Canada
4 W12 北京 11 W72 辽宁
Beijing liaoning
5 W13 北京 12 S150 青海
Beijing Qinghai
6 W16 黑龙江 13 S138 青海
Heilongjiang Qinghai
7 W42 河南
Henan
离心管中，充分混匀后于 65 ℃水浴保温 30 min，不
时将离心管上下颠倒摇匀。冷却至室温，加入等体积
的氯仿/异戊醇(24:1)，颠倒混匀 10 min，使内含物形
成乳浊液，10 000 r/min，离心 10 min 取上清转入新
的 1.5 ml 的离心管中，再次加入等体积的氯仿/异戊
醇抽一次。取上清加入 2/3 体积预冷的(-20℃)异丙醇，
于-20 ℃的冰箱中放置 30 min 或过夜。13 000 r/min，
离心 10 min 后倒出上清液收集沉淀，加入 75%的乙
醇 500 μL 清洗沉淀，10 000 r/min，离心 6 min，收
集沉淀，同样的方法再洗一遍后将沉淀于室温下自
然风干，加入 100 uL 的 TE 缓冲液(10 mmol/L,
Tris-HCl, pH 8.0, 1.0 mmol/L EDTA) 溶解 DNA，用
2 μL RNaseA 于 37℃保温 30 min，得到的 DNA 用
0.8%琼脂糖凝胶电泳，以λDNAHindⅢ为标准，检
查所得 DNA 的分子量、含量、纯度及完整性，作为
母液 4℃或-20 ℃保存备用。
3.4 SRAP-PCR 基本反应体系及反应程序
20 μL PCR 反应体系包括：10×扩增缓冲液
2 μL；MgC12 (25mmol/L) 2 μL；dNTPs (2.5 mmol/L)
2.0 μL；引物(10 umol/L) 0.6 μL，模板 DNA (50 ng/μL)
1 μL；DNA 聚合酶(2.5 U/L) 0.5 uL；加入 ddH2O 补
齐到 20 μL。反应程序：94℃预变性 5 min；进入 5
个循环，94℃变性 1 min ，35℃复性 1 min，72 ℃延
伸 1 min；再进入 35 个循环，94℃变性 1 min，50 ℃
复性 1 min，72℃延伸 1 min ；然后 72℃延伸 10 min，
4 ℃保存。
3.5 SRAP-PCR 反应体系优化
3.5.1 单因素优化
在基本反应体系中分别将 Mg2+、dNTPs、引
物、Tag DNA 聚合酶及模板 DNA 各因子浓度作如
下调整：Mg2+ 浓度分别为 1.5 mmol/L、2.0 mmol/L、
2.5 mmol/L、3.0 mmol/L 和 3.5 mmol/L；dNTPs 浓度分