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王惠哲等
, 2011,
黄瓜抗黑斑病相关
AFLP
标记筛选及
SCAR
转化
,
分子植物育种
Vol.9 No.87 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0087)
1628
并测序。测序结果显示，抗病带大小为
246 bp
，感
病带为
251 bp
，二者的差异在于
5
个碱基“
ATGGG
”
的插入和缺失
(
图
2)
。并将该标记成功转化为
1
对更
为稳定的
SCAR
标记，上游引物：
5'
-
GCCGGCGACT
AATAATCA
-
3'
；下游引物：
5'
-
CCTGAGTAATCTAT
AAAGCGTCG
-
3' (
已申报国家发明专利
,
申请号为
:
201010197951.4)
。
图
2
与黄瓜抗黑斑病相关基因连锁的
AFLP
标记片段的碱基序列
注
:
阴影部分为差异片段
Figure 2 Sequence of the AFLP marker fragments associated to the resistance locus of cucumber alternaria leaf spot
Note: The different fragment are in the shadow
利用所设计的
SCAR
引物对部分抗、感病单株
进行扩增，扩增产物经
5%
变性聚丙烯酰胺凝胶电
泳检测，可以看出原来的多态性仍然存在
(
图
3)
。
图
3 SCAR
标记
861
的扩增产物
注
: 1~3, 7~9:
抗病单株
; 4~6, 10~12:
感病单株
Figure 3 SCAR amplification by primer 861
Note 1~3, 7~9: resistant plants; 4~6, 10~12: susceptible plants
在抗病单株、感病单株中分别扩增出
200 bp
、
205 bp
长的片段，表明该标记仍然为共显性标记，可以用
于黄瓜黑斑病的分子鉴定。该共显性的
SCAR
标记
是黄瓜黑斑病分子标记研究中的第一个，因此将该
标记命名为
SA861
。表明已成功地将该
AFLP
标记
转化为
SCAR
标记。图
4
为引物
861
在部分
F
2
单株中
的验证。
2
讨论
本研究利用
AFLP
技术和
BSA
法明确了黄瓜
对黑斑病的抗性由一个隐性基因控制，可为亲本
选配和杂交组合配制提供可靠依据；并获得了与
黄瓜黑斑病抗性相关基因紧密连锁的分子标记
E-AT/M-TCT
，遗传距离为
4.96 cM
，表明该标记可
用于黄瓜抗黑斑病辅助育种；根据序列特点将该标
图
4 SCAR
标记
861
在部分
F
2
单株中的扩增
注
:
下带
:
抗病单株
;
上带
:
感病单株
;
上下带均有
:
中间类型单株
Figure 4 Amplification of SCAR marker 861 in some of F
2
plants
Note: Lower band: resistant plants; upper band: susceptible plants; Lower and upper band coexist: medium plants