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孟衡玲等, 2011, 三种提取铁皮石斛叶片总 RNA 方法的比较, 分子植物育种 Vol.9 No.83 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0083)
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很多植物上都有成功的报道，但由于不同植物及相
同植物的不同组织间在物质组成上千差万别，因此
一种方法仅适用于某种或某类材料，对于特殊的植
物材料，理想的 RNA 提取方法是在探索中逐渐完
善的。
本研究以多糖含量高的铁皮石斛叶片为材料，
采用 3 种不同的方法提取总 RNA，高质量的 RNA
是进行后续分子生物学研究的基础，并为其他富含
多糖类植物 RNA 的提取提供借鉴。
1 结果与分析
1.1 总 RNA 的电泳检测
由于在提取铁皮石斛 RNA 时，RNA 被大量
的多糖包裹而损失，导致提取的 RNA 浓度较低，
不能满足 RNA 需求量大的实验，因此，本研究以
普通的 TRIZOL 法提取的 RNA 浓度及纯度为对照，
比较三种方法提取的 RNA 质量。
普通的 TRIZOL 法提取总 RNA ：在加入氯仿抽
提离心后，上清液粘稠，离心后不能很好的和中间
层有机相分离，因此，在离心过程中无法去除多糖，
最后一步加 DEPC 处理水溶解时底部出现大量不溶
黏性物质，经电泳检测，没有 RNA(图 1A)。
百泰克公司通用植物总 RNA 提取试剂盒提取
的总 RNA 有两条完整的带，但带较弱，略有降解，
DNA 含量高(图 1B)，经纯化后，RNA 的浓度很低，
满足不了 RNA 需求量大的实验。
TIANGEN RNAprep pure Plant Kit 提取的 RNA
中有两条较完整的带，但 DNA 含量较高 (图 1C)，
在后续的 DNA 消化中往往消化不完全，且 RNA 的
含量都很低，只有 100 ng/µL~200 ng/µL，经纯化后
RNA 含量很低，几乎检测不到，给 RNA 的定量及
一些实验带来了很大的困难。
去多糖辅助剂+TRIZOL 法提取的 RNA 浓度较
高，有三条完整的带，且 RNA 的浓度较高，是试
剂盒法的 2~3 倍，DNA 污染小在琼脂糖凝胶电泳
中几乎看不到( 图 1D)，纯化后 OD 值在 1.8~2.0 之
间，三种方法提取的 RNA 浓度及纯度见表 1 。
图 1 A: 普通 TRIZOL 法 ; B: 百泰克试剂盒 ; C:
TIANGEN 试剂盒 ; D: “去多糖辅助剂+TRIZOL”法
Figure 1 A: Common TRIZOL method; B: BIOTEKE kit; C:
TIANGEN kit; D: Removing polysaccharides assistant plus
TRIZOL
表 1 3 种方法提取的铁皮石斛总 RNA 的平均浓度和纯度
Table 1 Total RNA purity and quantity of Dendrobium officinale by three methods
方法
Method
平均浓度(ng/µL)
Mean concentration (ng/µL)
总 RNA 平均纯度(A260/A280 )
Total RNA average purity (A260/A280)
TRIZOL 法
TRIZOL method
0 0
试剂盒法(百泰克试剂盒和天根试剂盒)
Kit method (Bioteke and Tiangen kit)
178
152
1.82
1.74
除多糖辅助剂+TRIZOL 法
Removing polysaccharides assistant + TRIZOL
method
468 1.95