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分子植物育种
(
网络版
), 2011
年
,
第
9
卷
,
第
1603
-
1607
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1603
-
1607
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1603
技术主题
Technology Feature
三种提取铁皮石斛叶片总
RNA
方法的比较
孟衡玲
1
,
杨生超
1
,
文国松
1
,
查应洪
3
,
段承俐
1,2
1.
云南农业大学中药材研究所
,
云南省中药材规范化种植技术指导中心
,
云南
, 650201
2.
浙江农林大学林业与生物技术学院
,
浙江
, 311300
3.
云南红河群鑫石斛种植有限公司
,
云南
, 661200
通讯作者
: dcl_12103@163.com;
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
83
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0083
收稿日期：
2011
年
05
月
20
日
接受日期：
2011
年
06
月
20
日
发表日期：
2011
年
06
月
27
日
这是一篇采用
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,
版权所有人允许并同意第三方无条
件的使用与传播。
引用格式：
孟衡玲等
, 2011,
三种提取铁皮石斛叶片总
RNA
方法的比较
,
分子植物育种
Vol.9 No.83 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0083)
摘
要
在提取富含多糖类植物组织
RNA
时，如何有效去除多糖类物质污染是一个首要问题，本文采用普通
TRIZOL
法、
试剂盒法和
“
去多糖辅助剂
+TRIZOL”
三种方法提取铁皮石斛幼嫩叶片总
RNA
，试验结果表明：采用
“
去除多糖辅助剂
+TRIZOL”
能够提出的
RNA
浓度较高、
DNA
含量很低，有明显的三条带，经纯化后
RNA
的
OD
值为
1.8~2.0
之间，
RNA
质量及浓度较好，经济实惠。
关键词
铁皮石斛
;
多糖
;
总
RNA
Research of Total RNA Extraction Methods from
Dendrobium officinale
Meng Hengling
1
, Yang Shengchao
1
, Wen Guosong
1
, Zha Yinghong
3
, Duan Chengli
1,2
1. Institue of Chinese Medical Materials, Yunnan Agricultural University, Yunnan Provincial Good Agricultural Practice Center of Chinese Medical Materials,
Yunnan, 650201, P.R. China
2 Faculty of Forestry and Biotechnology, Zhejiang Agriculture and Forestry University, Yunnan, 311300, P.R. China
3 Yunnan Honghe Dendrobium planting Co., Ltd., Yunnan, 661200, P.R. China
Corresponding author, dcl_12103@163.com;
Authors
Abstract
It is very important how to remove the polysaccharides pollution effectively when we extract high-quality RNA from
D.
officinale
. In this paper, we use three methods such as common TRIZOL, kit and “removing polysaccharides assistant + TRIZOL” to
extract total RNA from
D. officinale
. The experiment result shows that the third method is best, the total RNA has obvious three
bands, high quality and high concentration, low DNA and economy.
Keywords
D. officinale
;
polysaccharides; total RNA
研究背景
铁皮石斛
Dendrobium officinale
Kimura et
Migo
属兰科
orchidaceae
石斛属
Dendrobium
植物，
为石斛中的极品，是传统名贵的中药材，多糖是其
主要活性成分，是防老抗衰、养颜驻容、养肝明目
的上等保健药品。由于铁皮石斛植物组织中多糖含
量高于
17.76%~29.19%(
刘宏源等
, 2010)
，严重影响
了
RNA
的提取，纯度高、质量好的
RNA
是进行相
关分子生物学研究的前提和关键
(
李宏和王新力
,
1999)
。现已有很多文献报道了关于去除
RNA
中多
糖的一些方法，主要有：①在提取的
RNA
中加入
高浓度盐，改变多糖的溶解特性，通过苯酚、氯仿
等有机溶剂抽提去除
(Fang et al., 1992)
；②通过
LiC1
选择沉淀
RNA
，使部分多糖留在上清液中
(Su
and Gibor, 1988;
葛晓萍和石琰璟
, 2007;
岑鹏等
,
2009)
；③用低浓度乙醇选择沉淀多糖
(10%~30%)
，
而
RNA
仍保留于溶液中
(Tesniere and Vayda, 1991;
Lewinsohn et a1
.
, 1994;
顾红雅等
, 1995; Hu et al.,
2002)
；④无水乙醇和
5mol/L
醋酸钾溶液配合以去
除多糖杂质
(
朱昀等
, 2007)
；⑤采用有机溶剂乙二醇
丁醚
(
周波等
, 2004)
、
2
-丁氧乙醇
(
何振艳等
, 2005)
、
乙醚
(
袁明珠等
, 2005)
等去除多糖，虽然这些方法在