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后猛等
, 2011,
甘薯
IbSPF1
基因植物表达载体的构建
,
分子植物育种
Vol.9 No.82 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0082)
1600
图
7
植物表达载体
pCAMBIA2300-CaMV 35S(
或
SWPA2)
-
IbSPF1
的构造
Figure 7 Diagrgam for construct of plant expression vector
pCAMBIA2300-CaMV 35S (or SWPA2)-
IbSPF1
的四个转化子和阳性对照的
DNA
中均能扩增出与
IbSPF1
cDNA
片段大小相同的片段，而阴性对照未
能扩增出相应条带，说明重组质粒确已转入根癌农
杆菌。
图
8
pCAMBIA2300-CaMV 35S-
IbSPF1
导入根癌农杆菌结
果鉴定
注
: M:
分子量
Marker; P:
阳性对照
; N:
阴性对照
; 1~4:
阳
性克隆子
Figure 8 Identification of transformant for pCAMBIA2300-Ca-
MV 35S-
IbSPF1
into
Agrobacterium tumefaciens
strain
EHA105
Note: M: Marker; P: The positive control; N: The negative
control; 1~4: The positive clones
图
9
pCAMBIA2300-SWPA2-
IbSPF1
导入根癌农杆菌结果鉴
定
注
: M:
分子量
Marker; P:
阳性对照
; N:
阴性对照
; 1~4:
阳
性克隆子
Figure 9 Identification of transformant for pCAMBIA2300-
SWPA2-
IbSPF1
into
Agrobacterium tumefaciens
strain
EHA105
Note: M: Marker; P: The positive control; N: The negative
control; 1~4: The positive clones
2
讨论
WRKY
蛋白是
DNA
结合的调节蛋白，通过与
目标基因上的
W
盒元件互作，在转录水平上调控
基因的表达。各种高等植物当机体受到机械损伤、
病原物侵害或者非生物胁迫诱导时，
WRKY
基因都
能大量而快速的表达。研究证实，有三分之二的拟
南芥
WRKY
基因被病原侵染或被植物防卫反应的信
号分子水杨酸诱导
(Dong et al., 2003)
。水稻受真菌
病原体
M. grisea
侵染后，在被测试的
45
个
OsWRKY
基因中有
15
个基因的表达显著增加，而
其中
12
个受
M. grisea
诱导的
OsWRKY
基因也不同
程度的受到细菌病原体
Xanthomonas oryzae pv.
oryzae
(Xoo)
的差异调控
(Ryu et al., 2006)
。
(
仇玉萍
等
, 2004,
科学通报
, 49(18): 1860-1869)
对获得的
13
个水稻
WRKY
基因进行
Northern blotting
分析，发
现其中
10
个
WRKY
基因的表达受到
NaCl
、
PEG
、
低温
(4
℃
)
和高温
(42
℃
)
等
4
种非生物逆境因子胁迫
的影响，但其诱导表达模式在各种胁迫及胁迫诱导
时间上均存在着很大的差异，这种基因诱导表达模
式的差异可能体现于它们之间的生物学功能的差
异，在水稻抵抗不同非生物胁迫或不同抗逆境信号
转导中可能发挥不同的作用。在实验过程中，我们
利用
RT-PCR
技术对
IbSPF1
基因在甘薯不同生长部
位以及病原菌浸染、干旱胁迫和
NaCl
处理下的表
达谱进行了初步研究，发现其表达方式存在着很大
的区别
(
结果未发表
)
，说明
IbSPF1
基因同许多
WRKY
家族成员一样，可能参与调控植物抗逆反
应，这为转基因抗逆甘薯材料的获得提供了一种新
的思路。我们相信，随着研究的深入，人们将会对
IbSPF1
基因的功能和生理特性进一步了解，
IbSPF1
基因将会在植物抗逆遗传转化研究中发挥越来越
重要的作用。
CaMV 35S
启动子是一种高效的组成型启动
子，常用于调控植物外源基因的表达。但是利用诱
导型启动子
(
特别是胁迫诱导型启动子
)
来精细调控
基因表达，可能更加有利于毒害胁迫下植物抗逆蛋
白的产生
(Yoshida and Shinmyo, 2000)
。
SWPA2
启动
子是从甘薯悬浮培养组织中得到的一种氧化胁迫
诱导的
POD
启动子
(Kim et al., 2003)
，它的表达受
各种氧化胁迫，如过氧化氢、
UV
照射及机械伤害
的诱导。因此，
SWPA2
启动子有助于转基因植物中