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陈罡等 , 2011, 美国白蜡 SRAP-PCR 反应体系的建立与优化, 分子植物育种 Vol.9 No.74 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0074)
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可知，Taq 酶在 0.5 U 、1.5 U 和 2.0 U 水平间差异不
显著，而三个水平均与 1.0 U 水平差异显著。0.5 U~1
U 范围内结果均值明显下降，随后又随酶浓度的升
高而上升(图 6)，这一结果可能是由于直观分析以及
反应各因素的相互作用等原因所致。催化典型的
PCR 反应约需酶量 2.5 U(总反应体积为 100 μL)。本
实验采取 25 μL 体积，而且 0.5 U 时已经达到了较
好的扩增效果，因此选择 0.5 U 为最佳反应水平。
图 5 dNTPs 浓度与 PCR 评分结果关系图
Figure 5 Relationship between dNTPs concentration and PCR
score results
图 6 Taq 酶浓度与 PCR 评分结果关系图
Figure 6 Relationship between Taq DNA polymerase
concentration and PCR score results
1.7 引物浓度对 SRAP 扩增结果的影响
引物浓度过低时，其与模板 DNA 的结合率降
低，扩增产物量少；浓度过高时会引起非特异性扩
增，易形成引物二聚体。从引物浓度与 PCR 评分结
果关系可以看出，引物浓度在 0.2 μmol/L~0.5
μmol/L 范围内呈先上升后下降的趋势，0.3 μmol/L
和 0.5 μmol/L 水平间差异不显著，其余每二者之间
的差异均达到显著水平。当在 0.4 μmol/L~0.5
μmol/L 水平范围内，随着引物浓度的增高，结果均
值呈下降趋势(图 7)，这说明过高的引物浓度在一定
程度上影响了扩增条带的数目和质量，因此，选择
0.4 μmol/L 为最佳浓度水平。
图 7 引物浓度与 PCR 评分结果关系图
Figure 7 Relationship between primer concentration and PCR
score results
1.8 模板 DNA 浓度对 PCR 结果的影响
DNA 是 PCR 反应的模板，DNA 浓度过低时
扩增条带少且模糊；浓度过高则易产生非特异扩
增，出现扩增结果不稳定的假象。本试验反应结
果，DNA 在 10 ng·25/μL 和 20 ng·25/μL 水平间差
异不显著， 10 ng·25/μL~80 ng·25/μL 水平呈显著
上升趋势，其余水平间差异极显著 ( 图 8) 。已有研
究表明，模板 DNA 的适合范围较宽，由于低 DNA
浓度容易导致反应体系不稳定，同时为降低 TE
缓冲液中 EDTA 对反应中 Mg2+的影响，综合考虑，
最终选定 40 ng·25/μL 为最佳反应浓度。
图 8 模板 DNA 浓度与 PCR 评分结果关系图
Figure 8 Relationship between DNA template concentration
and PCR score results
1.9 美国白蜡 SRAP-PCR 反应体系的验证及不同种
源间多态性检测
为了进一步验证优化扩增体系的有效性，随机
选用 8 对引物组合对 4 个不同种源的美国白蜡( 亚拉
巴马种源 ,宾夕法尼亚种源 , 密西西比种源及田纳
西种源)材料进行 SRAP-PCR 扩增，产物经聚丙烯
酰胺凝胶电泳及银染后检测，结果均扩增出清晰的
谱带并表现出很好的稳定性( 图 9)，说明本试验建立