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耿雪芹等
, 2011,
影响月季不同外植体愈伤组织形态及其分化的因素
,
分子植物育种
Vol.9 No.73 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0073)
1541
表
1 PCR
反应
L
16
(4
5
)
正交设计表
Table 1 L
16
(4
5
) orthogonal design of PCR reaction
得分
Score
编号
Serial No.
Mg
2+
(mmol/L)
dNTPs
(mmol/L)
Taq
DNA
聚合酶
(U·25 μL
-1
)
Taq
DNA polymerase
(U·25μL
-1
)
引物
(μmol/L)
Primer (μmol/L)
模板
DNA
(ng·25 μL
-1
)
DNA template
(ng·25 μL
-1
)
1 2
平均得分
Average score
1
1.5
150
0.2
0.2
10
1 1
1
2
1.5
200
0.4
0.3
20
1 1
1
3
1.5
250
0.6
0.4
40
12 10
11
4
1.5
300
0.8
0.5
80
10 3
6.5
5
2.0
150
0.4
0.4
80
4 2
3
6
2.0
200
0.2
0.5
40
4 6
5
7
2.0
250
0.8
0.2
20
2 4
3
8
2.0
300
0.6
0.3
10
2 3
2.5
9
2.5
150
0.6
0.5
20
9 9
8
10
2.5
200
0.8
0.4
10
10 8
9
11
2.5
250
0.2
0.3
80
14 16
15
12
2.5
300
0.4
0.2
40
3 5
4
13
3.0
150
0.8
0.3
40
6 4 5
14
3.0
200
0.6
0.2
80
5 7
6
15
3.0
250
0.4
0.5
10
5 6
5.5
16
3.0
300
0.2
0.4
20
9 7
8
T1
4.875
4.25
7.25
3.5
4.5
T2
3.375
5.25
3.375
5.875
5
T3
9
8.625
6.875
7.75
6.25
T4
6.125
5.25
5.875
6.25
7.625
R
5.625
4.375
3.875
4.25
3.125
图
4 Mg
2+
浓度与
PCR
评分结果关系图
Figure 4 Relationship between Mg
2+
concentration and PCR
score results
1.5 dNTPs
浓度对
SRAP
扩增结果的影响
dNTPs
为
PCR
反应中的原料，其浓度过低会影
响扩增效果，降低产率；过高则会影响扩增的准确
性，且
dNTPs
能与
Mg
2+
结合，使游离的
Mg
2+
浓度
下降而影响聚合酶活力；同时
dNTPs
浓度过高也会
导致不必要的浪费。从
dNTPs
浓度与
PCR
评分结
果关系可以看出，在
0.15 mmol/L~0.3 mmol/L
范围
内，随着
dNTPs
浓度的增加
PCR
结果均值总体呈
上升趋势，在
0.25 mmol/L
时达到最高，随后呈下
降趋势；除
0.2 mmol/L
与
0.3 mmol/L
水平间差异
不显著外，其余各水平间均差异显著，最终选择
0.25
mmol/L
为最佳浓度水平
(
图
5)
。
1.6
Taq
DNA
聚合酶浓度对
SRAP
扩增结果的影响
Taq
DNA
聚合酶浓度是影响
PCR
反应的一个
重要因素，酶的浓度过低会影响扩增效率，使扩增
产物量减少；浓度太高容易导致非特异性扩增，并
且会造成浪费。由
Taq
酶浓度与
PCR
评分结果关系