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盛德鹏等
, 2011,
蛋白激发子
PeaT1
转化水稻恢复系多系一号的研究
,
分子植物育种
Vol.9 No.61 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0061)
1453
图
7
转基因水稻的
western blot
检测
注
: NT:
非转基因植株对照
; 1~4
为转基因水稻植株
; M:
蛋
白
marker
Figure 7 Western blot analysis of transgenic rice plants
Notes: NT: Non-transformed plants; M: Protein molecular
weight marker; 1~4: lines of Transformed rice plant
都明显高于其他两种培养基，更适合于多系一号成
熟胚的愈伤组织诱导。在此基础上成功的将
peaT1
基因转入多系一号，通过
Southern
杂交鉴定获得了
单拷贝的转基因植株，能够较好的为育种提供中间
选育材料。但是相对于日本晴等其他粳稻品种，多
系一号还是受到诱导频率低、诱导时间长和愈伤组
织生理状态不够理想的限制，对后期的转化效率造
成了直接的影响。通过不同培养基大量元素和微量
元素的混合使用以及各成分之间比例系数的调配，
可能能够筛选到更适合于多系一号成熟胚愈伤组
织诱导的培养基种类。
随着社会的发展和科技的进步，农药残留成为
了农业生产中的一个突出问题，生物农药的出现对
于缓解这一问题起到了关键的作用。蛋白激发子本
身不具备杀菌作用，通过启动植物体内的防御机制
是植物获得系统抗性，无污染、无残留，已经成为
新型生物农药发展的重要方向。蛋白激发子
PeaT1
具有热稳定性便于规模化生产提纯，不引起过敏反
应还能够促进植物生长和诱导植物产生抗病虫性，
而且不会导致病虫害产生抗药性
(Mao et al., 2009)
，
应用前景广阔。目前利用基因工程手段，通过导入
直接杀害或制约病虫害发展的基因，已经获得了大
量高产、优质、抗病虫的农作物，这些转基因作物
大多具有一类病原物或病虫害的抗性，很少具有广
谱抗性。而蛋白激发子
PeaT1
是通过诱导植物产生
免疫反应产生对病虫害的抗性，具有广谱性，对于
培养广谱抗性的优质品种具有重要的意义。
3
材料与方法
3.1
植物材料、农杆菌菌株、培养基和转化载体
恢复系多系一号的成熟种子由中国水稻研究
所黄世文老师赠送；蛋白激发子基因
peaT1
本实验
室从极细链格孢菌克隆得到；试验菌株
LBA4404
，
由本实验室保存；
N6
、
MS
、
NB
培养基基本成分
如下表所示
(
表
1)
；转化载体
pCMBIA2300
-
35S-OCS
由本实验室保存，该双元表达载体序列总长度为
9.5 kb
，插入
peaT1
后其
T-DNA
结构区如图所示
(
图
8)
。
3.2
表达载体的构建
根据
peaT1
基因序列设计特异引物
1 (
表
2)
，分别
图
8
植物表达载体
pCAMBIA2300
-
35S-peaT1
-
OCS
的
T-DNA
结构示意图
Figure 8 Structure of T-DNA region in plant binary vector of
pCAMBIA2300
-
35S-peaT1
-
OCS
表
1
水稻组培培养基基本成分
Table 1 Basic components of rice culture mediums used in the study
培养基名称
Medium
组分及含量
Composition
N6
N6
盐分及维生素
, 30 g/L
蔗糖
, 3.75 g /L
植物凝胶
, pH 5.8
N6 salts and vitamins, 30 g/L sucrose, 3.75 g /L Phytagel
MS
MS
盐分及维生素
, 30 g/L
蔗糖
, 3.75 g /L
植物凝胶
; pH 5.8
MS salts and vitamins, 30 g/L sucrose, 3.75 g/L Phytagel
NB
N6
大量元素
, B5
微量元素和维生素
, 30 g/L
蔗糖
, MS
铁盐
, 3.75 g/L Phytagel, pH 5.8
N6 major element, B5 minor element and vitamins, 30 g/L sucrose, 3.75 g/L Phytagel