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盛德鹏等
, 2011,
蛋白激发子
PeaT1
转化水稻恢复系多系一号的研究
,
分子植物育种
Vol.9 No.61 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0061)
1452
图
3
转基因水稻的再生
注
: A:
愈伤组织的诱导
; B:
根癌农杆菌侵染
; C:
抗性苗的分化
; D:
抗性苗生根
Figure 3 Construction of transgenic rice plants
Notes: A: Induction of calli; B: Infection with Agrobacterium; C: kanamycin-resistant plant regeneration; D: Rooting of
kanamycin-resistant rice
图
4
水稻再生植株的
PCR
检测
注
:
图示为引物
F2
的扩增结果
; M: DL2000; 1~11 PCR
转化
植株
; PC:
阳性对照
; NT:
非转基因水稻
Figure 4 PCR identification of regenerate rice plants
Notes: PCR analysis with primer F2; M: DL2000 mark; 1~11:
Transformed rice; PC: Positive control; NT: Non-transformed
rice
图
5
转基因水稻的
RT-PCR
检测
注
: M: DL2000 marker; 1~25PCR
鉴定阳性植株
; PC:
阳性对
照
; NT:
非转基因水稻
Figure 5 RT-PCR detection of transgenic rice plants
Notes: M: DL2000 marker; 1~25: lines of Transformed rice;
PC: Positive control; NT: Non-transformed rice
和
PCR
的结果基本吻合。
T
1
、
T
2
代转化水稻植株
PCR
和
RT-PCR
结果也基本一致
(
未显示
)
。
1.5
转基因植株的
Southern blot
分析
对
RT-PCR
鉴定为阳性的部分
T
2
代植株进行
Southern
杂交，结果如图所示
(
图
6)
：在转基因植株
检测到了明显的杂交信号，转基因植株的拷贝数都
图
6
转基因水稻的
Southern blot
分析
注
: NT
为非转基因植株对照
; 1~5
为转基因水稻植株
Figure 6 Southern bolt analysis of transgenic rice plants
Notes: NT: Non-transformed rice plants; 1~5: lines of
Transformed rice plants
在
3
个以下，有两株为单拷贝，而非转基因植株没
有出现杂交信号，这说明
peaT1
基因已经整合到了
转基因水稻基因组中。
1.6
转基因植株的
Western blot
分析
选取经
Southern blot
鉴定阳性的
4
株
T
2
代转基因
水稻植株进行了
Western blot
分析，结果如图所示
(
图
7)
，在四株
T
2
代转基因水稻中均检测到了大小约
35
kD
的特异性杂交条带，设置的非转基因对照植株没
有检测到杂交信号，再一次表明
T
2
代水稻基因组中
含有目的基因
peaT1
并得到表达。
2
讨论
水稻成熟胚愈伤组织诱导是根癌农杆菌介导
的水稻转化体系中的关键步骤，在本实验中用
N6
、
MS
和
NB
培养基进行多系一号成熟胚的愈伤组织诱
导，结果表明，
N6
培养基诱导愈伤组织数量和质量