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王帮太等
, 2011, SSR
标记简便快速鉴定玉米品种纯度
,
分子植物育种
Vol.9 No.60 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0060)
1448
图
3
引物
bnlg1396
在部分浚单
26
品种中的检测扩增带型
注
: 26,27,28
分别为
:
标准浚单
26
带型
,
浚单
26
母本对照带型
,
父本对照带型
; 3
为检测出的母本自交苗带型
Figure 3 PCR fragments amplified with the marker bnlg1396 in some Xundan 26 individuals
Note: 26: standard Xundan 26 profile; 27: mother of Xundan 26 profile; 28: father of Xundan 26 profile; 3: the detection of mother of
Xundan 26 profile
图
4
引物
umc1666
在部分浚单
29
品种中的检测扩增带型
注
: 22,23,24
分别为
:
标准浚单
29,
浚单
29
母本对照
,
父本对照
; 17
号为检测出的母本自交苗
Figure 4 PCR fragments amplified with the marker umc1666 in some Xundan 29 individuals
Note: 22: standard Xundan 29 profile; 23: mother of Xundan 29 profile; 24: father of Xundan 29 profile; 17: the detection of mother
of Xundan 29 profile
种纯度较低的现象。导致杂交种混杂的主要原因：
一是基础材料混杂；二是制种过程中防杂、去杂、
保纯技术措施控制不严，造成母本自交甚至异品种
授粉，从而出现自交株和异型株；三是种子处理等
过程中的机械混杂。在实际的种子纯度的检测过程
中发现，母本自交是影响种子纯度的主要原因，其
次为父本自交苗，这主要是由于人工去雄不干净、
不彻底造成的，另外制种田往往在母父本种植一定
比例后还零星种植父本以增加授粉效果，收获时去
除不彻底往往会混杂入父本自交苗。
与已报道的
SSR
标记鉴定玉米种子纯度的方法
相比
(
王凤格等
, 2003;
刘龙洲等
, 2003;
李晓辉等
,
2003;
李淑娟
, 2003)
，本实验使用的碱煮法微量胚乳
提取
DNA
方法通过减少药品的使用量，操作更快
捷、简便；使用的
2.5 µL
超微量
PCR
扩增体系在国
内还未见有相关报道，超微量体系的应用可以最大
限度节省
SSR
标记检测过程中相对成本较高的
taq
酶、
DNTP
等药品的用量，使扩增成本降至最低；
通过选择合适的引物，还可以在测序胶上多次点
样，配合两步快速银染显影方法，很大程度上节约
了电泳检测成本。这样就最大限度降低了标记检测
的总成本。玉米
SSR
标记高效、快速、经济的种子
纯度检测体系的建立，最大化的缩短了检测时间，
节约了检测成本。
本实验在银染过程中曾探索使用一种无毒、无
味的试剂代替甲醛的还原作用，目前还未找到合适
的试剂，对于该研究本课题将继续进行探索，争取
使
SSR
标记检测玉米种子纯度体系更经济、环保。
3
材料与方法
3.1
材料
试验材料为浚单
29
母本材料。检测材料为公司
繁育的浚单系列品种，包括浚单
22
、浚单
26
、浚单
28
、浚单
29
四个品种。按照
GB/T3543.5
-
1995
的抽
样规定，每车皮抽取
2
个样品，每样品随机取
100
粒
种子待检测。浚单系列亲本及标准杂交种材料由鹤
壁市农业科学院玉米育种研究室提供。
3.2
仪器设备
PCR
扩增仪、电泳仪、电泳槽、刀片等。
3.3
单籽粒微量胚乳碱煮法快速提取
DNA
碱煮法快速提取玉米胚乳
DNA
参考赵久然等
(2009)
的方法，作少量修改。具体步骤为：①将
籽粒种皮沿一侧轻轻切下，再切
1
-
3
薄片胚乳放入
PCR
管中。②加入
50 µL
提取液
(0.1 Mol/L NaOH)
，
加盖。③放入
PCR
扩增仪中
99
℃，
12 min
。④降
到室温后，加入
100 μL TE (1 mol/L Tris-HCl 5 mL,
0.5 mol/L EDTA 1 mL,
定容至
500 mL,
浓盐酸调
PH=2)
，静止备用。
3.4 PCR
扩增
分别采取
7.5 μL
、
5 μL
、
2.5 μL
的反应体系进行