Basic HTML Version
王海莲等
, 2011,
高粱
SSR
技术体系的优化及分子连锁图谱的构建
,
分子植物育种
Vol.9 No.47 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0047)
1353
图
1 A:
方法
1; B:
方法
2;
利用两种染色方法在
6%, 8%
和
10%
的凝胶中不同
PCR
反应体系对高粱基因组
DNA
的扩增结果
,
1~12, 13~24, 25~36, 37~48
分别是
10 µL, 15 µL, 20 µL
和
25 µL
反应体系
Figure 1 A: Method 1; B: Method 2; With two silver dyeing methods, amplification results of 10 µL, 15 µL, 20 µL and 25 µL PCR
reaction system in 6%, 8% and10% polyacrylamide gel electrophoresis
1.2
不同浓度的非变性聚丙烯酰胺凝胶对电泳结果
的影响
本实验利用非变性聚丙烯酰胺凝胶对
PCR
产物
进行检测，如表
2
所示。设
3
个浓度梯度
10%
，
8%
和
6%
，预先配制
40%
的
Acri/bis-Acri
母液，于
4
℃冰箱
保存。按表
2
的比例配制不同浓度的胶。电泳缓冲
液为
0.5xTBE
，
180V
恒压电泳。研究了三种浓度的
胶对
Xcup26
扩增产物的分离效果。
Xcup26
扩增片段
大小约为
250 bp
。由图
1
可以看出，利用三种不同浓
度的非变性聚丙烯酰胺凝胶对
4
种扩增体系的产物
进行电泳，采用两种染色方法，除了第
2
种染色方
法，
10%
的凝胶，
15 µL
反应体系的组合染色所得的
条带不清楚外，其他浓度的胶均能得到清晰的目的
条带。但是为了达到分离三种带型的目的，
10%
的
凝胶需要电泳
3h
，
8%
的凝胶需要电泳
2 h
，
6%
的凝
胶电泳仅需要
1h
。采用
6%
的凝胶电泳大大节约了分
离条带的时间。
1.3
不同的银染方法对扩增结果的影响
采用常规的非变性聚丙烯酰胺凝胶染色方法
和快速银染方法，对不同浓度和不同反应体系的样
品进行染色，由图
1
可以看出，用第一种染色方法，
对三种不同浓度的胶进行染色，均能得到比较清晰
的条带。而用第二种染色方法，对
6%
和
8%
的胶染
色，均能得到比较清晰的条带；对
10%
浓度的胶染
色，效果较差。综合比较方法
1
和方法
2
的染色结果，
方法
1
的染色结果均比较清晰；方法
2
由于省略了硫
代硫酸钠溶液去除背景这一步骤，而使凝胶的背景
加深。
表
2
不同浓度的非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制方法
Table 2 The preparation method of different concentrations of polyacrylamide gel
项目
Item
10%
8%
6%
40% Acri/bis-Acri (mL)
25
20
15
10xTBE (mL)
10
10
10
ddH
2
O (mL)
65
70
75
TEMED (µL)
100
100
100
10%AP (µL)
1000
1000
1000