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陈丽静等, 2011, 百合 SRAP-PCR 反应体系的建立与优化, 分子植物育种 Vol.9 No.24 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0024)
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2003; 任羽等 , 2004; 吴伟怀等, 2004; 武志朴等 ,
2005)。
SRAP 分子标记是基于 PCR 的标记系统，因此
PCR 中模板 DNA、引物、Mg2+ 浓度、dNTPs、Taq
聚合酶用量以及 PCR 中变性、退火、延伸的温度和
时间等因素均会对结果产生影响。本研究拟通过建
立百合 SRAP-PCR 反应体系并对其进行优化，以探
索新型分子标记技术 SRAP 在百合遗传图谱构建及
分子标记辅助育种研究中应用的可行性，为百合优
质种质资源的科学利用、分子辅助育种和品种鉴定
奠定技术基础。
1 结果与分析
1.1 模板浓度对 PCR 结果的影响
不同模板 DNA 浓度对 SRAP 扩增体系有明显
影响，由图 1 可以看出当模板 DNA 的量低于 20 ng
时，扩增产物的谱带相对较少，且谱带较淡，这是
因为模板的量太少，模板与引物不能有效配对，扩
增效率低；而大于 40ng 时，SRAP 产物基本保持不
变，说明 SRAP 扩增对模板 DNA 的浓度范围可以
较宽。
本试验模板 DNA 用量在 10 ng 到 90 ng 之间均
能够扩出较为清晰的条带，但模板量在高于 80 ng
图 1 DNA 浓度对 SRAP 反应的影响
注: M: DL2000 DNA maker; 1: 10 ng DNA/15μL; 2: 20 ng
DNA/15 μL; 3: 30 ng DNA/15 μL; 4: 40 ng DNA/15 μL; 5: 50 ng
DNA/15 μL; 6: 60 ng DNA/15 μL; 7: 70 ng DNA/15 μL; 8: 80 ng
DNA/15 μL; 9: 90 ng DNA/15 μL
Figure 1 The effects of DNA concentration on SRAP patterns
Note: M: DL2000 DNA maker; 1: 10 ng DNA/15 μL; 2: 20 ng
DNA/15 μL; 3: 30 ng DNA/15 μL; 4: 40 ng DNA/15 μL; 5: 50 ng
DNA/15 μL; 6: 60 ng DNA/15 μL; 7: 70 ng DNA/15μL; 8: 80 ng
DNA/15 μL; 9: 90 ng DNA/15 μL
和低于 40 ng 时分别出现高分子量条带的模糊和中
分子量条带的缺失。推测模板量太低，影响扩增产
物的形成，而过多的模板 DNA 在扩增产物积累到
一定量时会限制反应。通过比较，本研究选用 80 ng
为最佳模板。
1.2 引物浓度梯度试验结果
结果见图 2。从反应结果来看最佳引物浓度十
分重要：较低的引物浓度 (A1、A2、B1、B2 所示条
带)，引物与模板的结合概率下降，扩增条带浅，有
的甚至检测不出来。较高的引物浓度 (A8、A9、B8 、
B9 号带)扩增的条带整齐清晰，效果较好。适中的
引物浓度(A3 、A4、B3、B4 号带)扩增的条带整齐
清晰，效果也较好，考虑到较高的引物浓度会引起
引物二聚体的产生，确定引物浓度为 0.11μmol/L。
图 2 引物浓度对 SRAP 反应的影响
注: 引物浓度设置见表 2; M: DL2000 DNAmaker
Figure 2 The effects of primer concentrations on SRAP
Note: primer concentrations designed in table2; M: DL2000
DNA marker
1.3 最佳 Mg2+ 浓度的确立
结果如图 3 所示。在引物浓度相同时，随着
Mg2+ 浓度的增加，产物量先增加后减少。考虑到
Mg2+浓度过低不利于酶的激活，Mg2+ 浓度太高又容
易产生非特异性扩增，故试验最终选定 Mg2+浓度为
1.67 mmol/L。
1.4 dNTP 浓度对 PCR 结果的影响
Mg 2+浓度为 1.67 mmol·L-1 的情况下，随着 dNTPs
浓度的增加，PCR 扩增产物的量逐渐增加；同时非
特异性带也随之增加；当 Mg2+ 浓度为 0.83 mmol/L
时，随着 dNTP 浓度的增加，扩增产物先增加后减
少。这与前人的研究不完全一致(李严等, 2005)。本
试验最终选择 dNTP 浓度为 0.267 mmol/L，Mg2+浓
度为 1.67 mmol/L。结果如图 4 所示。