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分子植物育种
(
网络版
), 2011
年
,
第
9
卷
,
第
1173
-
1181
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2011, Vol.9, 1173
-
1181
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
1173
研究报告
A Letter
百合
SRAP-PCR
反应体系的建立与优化
陈丽静
1,2
,
曹珊
1
,
王玉坤
1
,
刘烜晨
1
,
张丽
1
,
明军
3
,
陶承光
2
,
李天来
1
1.
沈阳农业大学辽宁省生物技术重点实验室
,
设施园艺省部共建教育部重点实验室
,
沈阳
, 110866
2.
辽宁省农业科学院
,
沈阳
, 110161
3.
中国农科院蔬菜花卉研究所
,
北京
, 100081
通讯作者
: chenlijing1997@126.com; ltl@syau.edu.cn;
作者
分子植物育种
, 2011
年
,
第
9
卷
,
第
24
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0024
收稿日期：
2011
年
01
月
11
日
接受日期：
2011
年
02
月
28
日
发表日期：
2011
年
03
月
02
日
这是一篇采用
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,
版权所有人允许并同意第三方无条
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引用格式：
陈丽静等
, 2011,
百合
SRAP-PCR
反应体系的建立与优化
,
分子植物育种
Vol.9 No.24 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0024)
摘
要
建立适宜百合
DNA
的
SRAP-PCR
扩增体系，为百合基因图谱的构建和分子标记打下基础。以百合为试验材料，
试验在确定了模板浓度和引物浓度后，采用二因素交叉试验方法，对影响百合
SRAP
反应体系的
5
种因素
(
模板
DNA
、引物、
Mg
2+
浓度、
dNTPs
、
Taq
聚合酶用量
)
进行优化筛选，建立了适合百合的扩增多态性高、重复性好、带型清晰的最佳
SRAP-PCR
反应体系，即在
15 μL PCR
反应体系中含有
1.5 μL 10×PCR Buffer
、
80 ng
模板
DNA
、
0.11 μmol/L
引物、
1.67 mmol/L Mg
2+
、
0.267 mmol/L dNTPs
、
1.0 U
Taq
聚合酶，
PCR
产物变性时用
10 μL
变性剂。
关键词
百合
; SRAP;
二因素交叉试验设计
;
体系优化
Optimization of SRAP-PCR in
Lilium
Chen Lijing
1,2
, Cao Shan
1
, Wang Yukun
1
, Liu Xuanchen
1
, Zhang Li
1
, Ming Jun
3
, Tao Chengguang
2
,
Li Tianlai
1
1. Bioscience and Technology institute and Key Laboratory of Protected Horticulture (Ministry of Education) Shenyang Agriculture University, Shenyang,
110161, P.R. China
2. The Liaoning Academy of Agricultural Sciences, Shenyang, 110161, P.R. China
3. The institute of vegetables and flowers Chinese academy of agricultural sciences, Beijing, 100081, P.R. China
Corresponding authors, chenlijing1997@126.com; ltl@syau.edu.cn;
Authors
Abstract
The aim of the research was to establish SRAP-PCR amplification system which was suitable for Lilium DNA so as to
lay foundation for the construction of gene map and molecular marker in Lilium. Being taken as tested materials, SRAP-PCR
reaction program in watermelon was investigated and the gradient experiment was conducted on each impact factors in SRAP-PCR
reaction system to screen and establish the optimum SRAP-PCR reaction program and system that could amplify high polymorphism,
good repeatability and clear band pattern. The optimum SRAP-PCR reaction procedure system (Total of 15 μl) was as follows: 1.5 μL
10×PCR Buffer
，
DNA 80 ng, primer 0.11 μmol/L, Mg
2+
1.67 μmol/L, dNTPs 0.267 μmol/L,
Taq
polymerase 1.0 U. The program and
system could meet the demands for genome SRAP amplification in Lilium. It was feasible to apply SRAP marker in genetic research
in Lilium. The optimum volume of Loading buffer is 10 μL.
Keywords
Lilium
; SRAP; Crossover test of two factors; PCR reaction; Optimization
研究背景
SRAP (Sequence-related amplified polymorphism
，
相关序列扩增多态性
)
分子标记技术是由美国加州
大学
Li
和
Quiros
博士
(2001)
在
2001
首先提出，也
称为基于序列扩增多态性
(Sequence-based amplified
polymorphism
，
SBAP) (Li et al., 2003)
，具有简单、
高效、高共显性、重复性、易测序等优点
,
适合应用
于遗传图谱构建、基因定位与克隆、比较基因组学、
遗传多样性分析等研究领域
(Ferriol et al., 2003; Li et
al., 2003; Li et al., 2001)
。目前已经在辣椒、油菜、
大蒜、莴苣、芹菜、马铃薯、苹果、柑橘、樱桃、
梅子、棉花、小麦和水稻等植物研究中应用
(Ferriol
et al., 2003; Li et al., 2003; Li et al., 2001;
李丽等
,
2006;
李媛媛等
, 2007;
林忠旭等
, 2003;
林忠旭等
,