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陈丽静等
, 2011,
百合
SRAP-PCR
反应体系的建立与优化
,
分子植物育种
Vol.9 No.24 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0024)
1175
图
3 Mg
2+
和引物浓度对
SRAP
反应的影响
注
: Mg
2+
和引物浓度设置见表
2; M: DL2000 DNAmaker
Figure 3 The effects of Mg
2+
+concentrations on SRAP
Note: Mg
2+
and primer concentrations designed in table4; M: DL2000 DNAmarker
图
4 dNTPs
浓度对
SRAP
反应的影响
注
:
引物浓度设置见表
2, M: DL2000 DNAmaker
Figure 4 The effects of dNTPs concentrations on SRAP
Note: dNTPs concentrations designed in table5; M: DL2000 DNAmarker
1.5
Taq
聚合酶的用量对
PCR
结果的影响
试验表明，
Taq
酶量在
0.5 U
-
2 U/15 μL
反应体
系时都能得到可重复的清晰条带，基于经济原因考
虑本试验最终选择采用
1 U/15 μL
反应体系，结果
见图
5
。
图
5
Taq
DNA
聚合酶的纯度和用量对
SRAP
反应的影响
注
:
酶浓度从左至右依次为
2.0, 1.5, 1.0, 0.5; M: DL2000
DNA maker
Figure 5 The effects of
Taq
DNA Polymerase
Note:
Taq
DNA Polymerase concentrations 2.0, 1.5, 1.0, 0.5; M:
DL2000 DNAmarker
1.6
退火温度和循环次数对扩增的影响
退火温度的高低影响
PCR
的特异性，退火温度
越高，扩增的特异性越高，本试验按照
Li
等
(2001)
的反应程序对百合
DNA
进行扩增，电泳结果显示
扩增条带不够清晰。因此设计了退火温度梯度试
验：采用了在一个循环体系中采用一低一高两个不
同退火温度，首先在
34
℃的退火温度下扩增
5
次循
环，然后适当提高退火温度在
50
℃扩增
35
个循环。
可以得到比较理想的扩增结果如图
6
所示。
优化后的程序为：
94
℃
5 min
，
94
℃
1 min
，
34
℃
1 min
，
72
℃
1 min, 5 cycles
；接下来将复性温度提
高到
50
℃，
94
℃
1 min
，
50
℃
1 min
，
72
℃
1 min
，
图
6
循环程序对
SRAP
反应的影响
注
: 1
-
6
采用循环程序
1; 7
-
12
采用循环程序
2; M: DL2000
DNA maker
Figure 6 The effects of circles program on SRAP patterns
Note: 1
-
6 adopted circles program1; 7
-
12 adopted circles
program2; M: DL2000 DNA marker