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林茂等, 2011, 甘蓝型油菜隐性核不育系及其 DH 系的纯度的 SSR 检测, 分子植物育种 Vol.9 No.6 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0006)
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图4 隐性核不育系 NAB- 2 姊妹交后代与胚状体苗的SSR分
子聚类分析
Figure 4 Dendrogram for the plants of embryoid and the
first-cousin cross offspring based on SSR Markers
图谱构建及种质资源评估方面。
3材料与方法
3.1 材料及群体构建
贵州省油料研究所 (前身为贵州省农业科学院
油料研究所 )2001年春发现在引进的杂交油菜组合
杂901 F2中，分离出不育株系和可育株，选择不育
株与自育双低品系 R-9杂交，次年开始从杂交后代
中分离出的不育株与可育株进行连续多年多代姊
妹交，通过 5 代姊妹交获得稳定双低隐性细胞核不
育系NAB -2 。2007年用NAB- 2中24个不育株与24
个可育株作成对姊妹交，获得 24个姊妹交组合(编
号为 DZ25~Z48, 表2)，同年秋天种植在贵州省农业
科学院内试验地，冬季提取各组合 DNA，包括 12
个不育株 (DZ25, DZ27~30, DZ34~35, DZ38~39,
DZ41~42和DZ44)和12个可育株。2008年春取姊妹
交后代可育株花粉进行游离小孢子培养，培养的
DH 植株移栽到贵州省农业科学院内试验地。
3.2 小孢子培养
小孢子培养参考李超(2008)的方法。培养的DH
植株按一个组合后代选择一个胚，一个胚诱导出来
的植株列为一个DH单株，编号见表2，由24个不同
DH 植株构成DH系群体。
3.3 分子标记
2008 年冬季采用天根快速植物 DNA试剂盒提
取基因组DNA，SSR引物由重庆市油菜工程技术研
究中心提供(表1)，分子标记参考付福友(2007 年)的
方法。反应体系21 μL：包括ddH2O 7.5 μL，10×Taq
Buffer (含Mg+2) 1.2 μL，dNTPs (10 Mm) 0.2 μL，
F-Primer (50 ng/μL) 0.5 μL，P-Primer (50 ng/μL) 0.5 μL，
Taqase (5 U/μL) 0.10 μL，DNA templete (50-100 ng/μL)
1.0 μL，Mineral oil 10.0 μL。扩增程序：94 ℃ 5 min，
(94℃ 45s, 55℃ 45s, 72℃ 1 min)×35cycles ，72℃
10 min。电泳及银染试剂：封胶琼脂1.5%：琼脂1.5 g，
加水100 mL；固定液1 000 mL：无水乙醇100 mL，
冰醋酸5 mL，水895 mL；显色液500 mL：NaOH 7.5 g ，
甲醛5.5 mL ，加水定容500 mL；0.2%染色液AgNO3
1 000 mL：AgNO3 2.0 g，水1 000 mL；30％丙烯酰胺
500 mL：丙烯酰胺145 g：N-N-二甲基双丙烯酰胺5 g，
加水定容至500 mL；5×TBE Buffer 1 000 mL：Tris碱
54.0 g，硼酸27.5 g，0.5 mol/L pH8.0的EDTA 20 mL，