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林茂等
, 2011,
甘蓝型油菜隐性核不育系及其
DH
系的纯度的
SSR
检测
,
分子植物育种
Vol.9 No.6 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0006)
1048
图
3
引物
625
对
DH
植株和姊妹交株系的扩增结果
注
:
泳道
1,3,5,…45,47
是胚状体苗
; 2,4,6,…46,48
是姊妹交后代
Figure 3 DNAmapping by SSR 625 primer between the DH plants and first-cousin cross offspring
Note: The offspring increased in odd path of electrophoresis from DH plants and in even path of electrophoresis from first-cousin
cross offspring
育系统。在细胞核雄性不育中，存在着两类不育系
统，一类是显性细胞核雄性不育
(DGMS)
，另一类
是隐性细胞核雄性不育
(RGMS)
。
通过
20
对
SSR
引物对
24
个甘蓝型油菜隐性细胞
核雄性不育系
NAB
-
2
姊妹交
F
1
代及其产生的
DH
株
系进行纯度比较，有
18
对引物扩增出
31
个多态性位
点，平均每对引物扩增出
1.72
个多态性位点。在
18
对引物中有
17
对引物在
DH
植株之间产生了多态
性，
11
对引物检测出
24
个
DH
植株中唯一株可育株，
6
对引物能将姊妹交后代和相应的
DH
植株明显区
分开，但没有一个引物在姊妹交后代中扩增出多态
性，似乎说明了姊妹交后代的株系之间纯合性高，
遗传差异很小。然而，将这
24
个姊妹交后代通过小
孢子离体培养，所诱导出的
DH
植株再进行
SSR
标记
鉴定，却显示出单株之间存在遗传多样性，由此可
见，对于甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育系的纯度
鉴定，通过小孢子培养后进行
SSR
检测
DH
植株，更
能显示出不育系株系间的纯度。该研究结果从
NAB
-
2
的选育过程得以验证，该隐性核不育系是通
过了七代姊妹交选育的，单株之间遗传差异还存在。
理论上讲，在甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育
系中，可育植株的小孢子具有不育和可育两种基因
型，通过游离小孢子离体培养后的
DH
植株中，可育
株和不育株应各占
50%
，但是本研究结果显示，在
田间观察
24
株
DH
植株中，有
23
株表现雄性完全不
育，
1
株表现雄性可育。出现
1
株可育株是携带不育
基因的小孢子更易诱导成苗和加倍还是抽样所带
来的误差所致？或者是因为在小孢子游离培养时染
色体没能加倍？这还需要进一步研究。在
24
个
DH
植
株内通过
SSR
标记显示有
6
株在
DNA
水平上存在差
异，
18
对多态性引物中
11
对引物都检测出了
DH
植株
中的
1
株雄性可育株，能否在
11
对引物中筛选出与
不育基因紧密连锁的标记值得深入研究。此外，本
研究认为，对于甘蓝型油菜隐性细胞核雄性不育
系，检测姊妹交后代的纯度不如检测其通过游离小
孢子培养后的
DH
植株结果可靠。当隐性细胞核雄性
不育系作为构建
QTL
作图群体亲本选择时，应充分
考虑亲本的纯度。
利用
SSR
标记的检测油菜品系纯度，优点很多：
对基因组
DNA
质量要求低、
DNA
用量少、扩增产物
稳定、标记图谱信赖度高、共显性标记、带型简单，
适于大规模快速分析，广泛应用于遗传多样性分析、