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分子植物育种 (网络版), 2010 年, 第 8 卷 , 第 7 篇
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2010, Vol.8, No.7
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表 1 高羊茅总 RNA 纯度及浓度分析
Table 1 The quality of RNA sample by different extraction methods
进一步的分子生物学研究， OD260/OD230 比值在
2.0~2.5之间，表明这2种方法得到的RNA 纯度高；
异硫氰酸胍法提取的RNA 样品 OD260/OD280比值较
小，说明有蛋白或苯酚存在，其OD260/OD230比值小
于2.0，表明其中有大量的小分子或盐存在，所得的
RNA有待进一步纯化。
1.3 高羊茅总 RNA 的 cDNA-AFLP 分析
cDNA-AFLP 实验最为关键的步骤是获得高质
量的 cDNA 模板并对其进行充分彻底酶切，而提取
高质量的总 RNA 是合成高质量 cDNA 模板的前提。
为了进一步验证改良的异硫氰酸胍法所提的总
RNA 质量，通过合成 cDNA 双链然后进行
cDNA-AFLP 分析，结果表明异硫氰酸胍法经过改
良后所提取的总 RNA 质量高、无污染，经反转录、
酶切后可获得清晰的 AFLP 图谱( 见图 2)，完全可用
于后续的 cDNA-AFLP 分析。
图 2 改良的异硫氰酸胍法提取高羊茅叶片总 RNA 的
cDNA-AFLP 分析
Figure 2 cDNA-AFLP analysis of total RNA by modified
AGPC protocol
2 讨论
高质量的 RNA 是进行基因克隆、基因表达研
究等的前提。目前常见的提取方法有异硫氢酸胍
法、CTAB 法、热硼酸法、苯酚法、阴离子去污剂
法、LiCl-尿素法、TRIZOL 试剂快速提取法、Gomez
法、CsCl 超离提取法等多种，但由于植物种类的不
同以及同一植物的不同部位都有其各自的生理结
构特点，且所含的内源物质存在差异，因此需要根
据各种方法自身的特点，对其进行筛选和改进，才
能获得适合于不同植物 RNA 提取的最佳方法( 印华
等 , 2009)。此外，由于 RNA 极易被微量的 RNase
所降解，同时植物组织中含有大量的次级代谢产
物，对总 RNA 的提取干扰很大，这样使得植物组
织总 RNA 的提取相对较难 ( 李晓颖等 , 2010;
Lewinsohn et al., 1994)。Trizol 法因其操作简单快捷
的优点，是目前提取 RNA 常用的首选方法之一，
实验表明 Trizol 法最简单，也最省时间，仅需要 2 h
左右，并且获得的高羊茅总 RNA 完整性和纯度都
较好。但是其费用相对较高，不适合大量植物组织
RNA 的提取。异硫氰酸胍法是目前实验室提取植物
总 RNA 常用的方法之一，其主要是利用异硫氰酸
胍、十二烷基肌氨酸钠与巯基乙醇共同作用使蛋白
质变性，从而抑制 RNase 活性，同时在酸性条件下
DNA 可与蛋白质一起变性被离心下来，RNA 则被
分离，溶于上清液中。其成本较为低廉，时间上需
要 3~4 h，但是所获得的高羊茅总 RNA 的质量较差，
RNA 有一定的降解，且有蛋白质污染。RNA 的降
解可能是由于研磨时间较长，RNase 活性未被抑制，
吸光值
Absorbance
方法
Methods
RNA 产率(μg/g)
RNA yield (μg/g)
OD260/OD280 OD260/OD 230
异硫氰酸胍法
Isothiocyanate method
98.10 2.291 1.706
Trizol 法
Trizol method
118.60 1.831 2.198
改良的异硫氰酸胍法
Improved isothiocyanate method
224.40 1.871 2.118