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分子植物育种 (网络版), 2010 年, 第 8 卷 , 第 7 篇
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2010, Vol.8, No.7
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强等特征，是一种重要的牧草和草坪兼用型草种，
在国内外农牧业和草坪业中占据重要的地位( 黄新
等, 2008) 。获取高质量的 RNA 是进行高羊茅分子
生物学研究的必要前提和关键技术，如目的基因的
克隆、cDNA 文库的构建、RT-PCR 分析、印迹杂
交分析等都需要高质量的 RNA(赵军胜, 2007)。尽
管 RNA 的提取已经成为很成熟的技术，但在实际
研究中经常很难做到顺利获得高质量的 RNA(何庆
元等, 2009)。对许多植物而言，由于缺乏有效的高
质量 RNA 提取方法，使其分子生物学研究受到限
制(Bahloul and Burkard, 1993) 。由于植物体内含有
多种次生代谢产物以及蛋白质和多糖等大分子物
质，影响 RNA 的提取效率，干扰之后的逆转录、
酶切等试验，此外不同植物的代谢产物差异非常显
著，加之植物组织本身的特异性，所以很难有一种方
法适合于所有植物总 RNA 的提取(Ainsworth, 1994)。
目前，国内关于植物组织总 RNA 提取方法的
报道很多，绝大多数常规的植物组织总 RNA 提取
方法均存在有比较费时的缺点( 李聪等, 2008)。由于
RNA 易降解，所以在操作过程中时间越短，降解的
可能性才会越小。Trizol 试剂盒是一个省时的方法，
但价钱较为昂贵。异硫氰酸胍法是利用异硫氰酸
胍、β-巯基乙醇、十二烷基肌氨酸钠等使 RNase 变
性，并使 RNA 在酸性条件下游离进入水相，而变
性的 RNase 和其他的蛋白连同基因组 DNA 进入有
机相。经反复的酚氯仿抽提后的水相用异丙醇沉淀
可得高质量的 RNA。其优点在于步骤简单，省时快
速，能同时处理多个样品(Gasic et al., 2004) 。我们
通过对常用的异硫氰酸胍法进行改进，旨在建立一
种简单快速并适于高羊茅总 RNA 的提取方法，为
进行后续的分子生物学研究奠定基础。
1 结果与分析
1.1 不同方法提取高羊茅总 RNA 完整性检测
琼脂糖凝胶电泳检测结果显示 Trizol 法能够从
成熟的高羊茅叶片中提取出总 RNA ，28S rRNA 与
18S rRNA 条带亮度接近于 2：1 ，说明 RNA 未被降
解 (见图 1A) 。Trizol 法虽然有快速高效的特点，但
其价格昂贵，不适用于大量植物组织提取。
异硫氰酸胍法提取高羊茅总 RNA 的电泳检测
显示( 图 1B)：28S rRNA 与 18S rRNA 条带均有拖尾
现象，5S rRNA 条带较亮，说明总 RNA 有部分降
解，且存在 DNA 污染。同时点样孔有亮带，说明
蛋白质污染严重。
实验对异硫氰酸胍法进行改进后，琼脂糖凝胶
电泳检测结果显示( 图 1C)，点样孔中没有亮带，证
明没有蛋白质的污染，图中 28S rRNA 和 18S rRNA
两条带非常清晰，并且这两条带的亮度接近 2 ：1，
同时 5S rRNA 条带很弱，证明总 RNA 中没有 DNA
污染，且纯度高、完整性好，没有明显的降解。
1.2 不同方法提取高羊茅总 RNA 纯度及浓度检测
吸光度比值大小直接反映多糖、多酚和蛋白质
的污染程度。由表 1 可知，采用改良后的异硫氰酸
胍法和 Trizol 法提取的总 RNA 其 OD260/OD280 比值
在 1.8~2.0 之间，表明 RNA 完整性很好，可以用于
图 1 不同方法提取高羊茅叶片总 RNA 的检测结果
注: A: Trizol 法; B: 异硫氰酸胍法; C: 改良的异硫氰酸胍法
Figure 1 Agarose gel electrophoresis of total RNA by different methods
Note: A: Trizol method, B: Isothiocyanate method, C: Improved isothiocyanate method