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分子植物育种
(
网络版
), 2010
年
,
第
8
卷
,
第
1
1
篇
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2010, Vol.8, No.1
1
http://mpb.
5th
.sophiapublisher.com
共
10
页，第
4
页
剪取
6
株
GUS
基因检测和
PCR
检测为阳性的
转基因及
1
株对照野生蕉的新鲜叶片，提取总
RNA
，
RT-PCR
检测
rolC
的表达情况，发现
6
株
GUS
基因阳性植株均能获得
550 bp
的特异性条带
(
图
7)
，与预期结果相符，进一步证明外源基因
rolC
已经整合到野生蕉的基因组中，并可以在转基因野
生蕉中正常表达。
图
7
转
rolC
基因再生苗
RT-PCR
检测
注
: M: 100 bp DNA
分子量标记；
1:
阳性对照
(pCB121-
rolC
);
2:
未转化植株对照
; 3-8:
转基因植株
Figure 7 RT-PCR analysis of the transgenic banana
Note: M: 100 bp DNA marker; 1: pCB121-
rolC
as positive
control; 2: Non-transformed plant; 3-8 Transgenic wild banana
clones
1.5
转
rolC
基因野生蕉根系与野生型植株根系的生
根能力的比较
再生潮霉素抗性芽及对照芽转入到无激素生
根培养基
7-10 d
左右，即可见到有根产生，转基因
与对照根的出现时间差不多，但是，转
rolC
基因野
生蕉在无激素的生根培养基中，根生长非常迅速，
每株发根数在
6-8
条，色白，根长达到
12 cm
以上；
而对照野生蕉根系生长缓慢，颜色由白变褐，每株
根数在
3-4
条左右，最长根长不超过
5 cm (
图
8)
。
该试验结果表明，转
rolC
基因野生蕉在无激素培养
图
8
转
rolC
基因再生苗与对照根系比较
Figure 8 Root system of the
rolC
transgenic wild banana
comparison with wild type
基上与对照相比，具有较强的发根能力。
30 d
将再
生苗移栽至人工气候箱，目前，已有
20
株转
rolC
基因野生蕉移栽成活，长势正常，拟作进一步的形
态学观测和分子检测。
2
讨论
成功的香蕉遗传转化体系依赖于高效的筛选
体系，已有的试验表明，潮霉素最适合于用来做香
蕉遗传转化的筛选抗生素
(Sreeramanan et al.,
2006)
，本试验将植物表达载体
pBI121
用
Hin
d
Ⅲ
和
Eco
R
Ⅰ
双酶切得到的小片段
(35S-GUS-NOSt)
插入
到植物表达载体
pCAMBIA1301
，改造构建了植物
表达载体
pCB121
，该载体不仅利用了原载体
pCAMBIA1301
的潮霉素抗性基因，而且也利用了
原载体
pBI121
的多克隆位点，可以方便地插入目
的基因。同时，
pCB121
质粒含有两个
GUS
基因，
该报告基因能够利用方便的
GUS
组织染色法进行
检测转化植物的效果。但是，原
pCAMBIA1301
中
的
GUS
基因含有两个
exon
，而原
pBI121
中
GUS
基因不含
exon
，由于后者能够在农杆菌中表达，在
对转基因材料
GUS
染色时，会产生假阳性。因此，
在插入目的基因的时候，一般把后者切去。本试验
将
rolC
基因克隆到
pCB121
的
Xba
Ⅰ
和
Sac
Ⅰ
位点
构建成植物表达载体
pCB121-
rolC
，该载体具有潮
霉素抗性基因和
GUS
基因，可以非常方便的用来
对香蕉的遗传转化。
本试验在前期建立的香蕉遗传转化体系的基
础上
(
胡春华等，
2010a)
，构建了
rolC
基因并将其转
到了野生蕉中，通过对转基因野生蕉的
GUS
基因
表达检测和
rolC
基因表达检测，证明
rolC
基因已
经整合到野生蕉的基因中并能成功表达，同时也证
明
pCB121-
rolC
载体构建的正确性。前人对
rolC
基
因导致植株生根能力提高的作用，在本试验的转基
因野生蕉中也得到进一步的验证。下一步工作我们
将继续对转
rolC
基因植株进行观测和评价，为将
rolC
基因转化香蕉栽培品种，筛选出矮化、根系发
达的香蕉新种质提供参考。
3
材料与方法
3.1
供试材料与试剂
本实验中使用的植物表达载体
pBI121
和