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分子植物育种 (网络版), 2010 年, 第 8 卷 , 第 11 篇
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2010, Vol.8, No.11
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共 10 页，第 3 页
图 3 重组质粒 pCB121-rolC 双酶切鉴定
注: M: 100 bp DNA 分子量标记；1 ：rolC PCR; 2: 质粒
pCB121-rolC Xba Ⅰ和 SacⅠ双酶切
Figure 3 Identification of pCB121-rolC plasmid with digestion
Note: M: 100 bp DNA marker; 1: PCR products of rolC 2:
pCB121-rolC plasmid restricted by Xba andⅠ SacⅠ
将共培后的 ECS 转接到的液体筛选培养基 (含有
潮霉素 5 mg/L) 进行抗性筛选，每 10 d 继代 1 次，
经过 3 代筛选后的培养物用 GUS 组织染色。结果
表明，获得的潮霉素抗性悬浮系几乎均能染上蓝色
(图 4-A)，即经过抗性筛选获得了野生蕉转 rolC 基
因的胚性细胞悬浮系。将转化胚性细胞悬浮系转入
到胚诱导培养基上，诱导培养约 60 d 获得成熟体细
胞胚(图 4-B) 。体胚经萌发，1 个月后获得了生长正
常的再生芽。
取健壮的再生潮霉素抗性芽及对照芽转接到
不含激素的 MS 基本培养基进行生根培养，期间观
测其生根情况。30 d 后将苗小心从瓶中取出，彻底
洗净根上培养基，移栽至人工气候箱继续生长。
图 4 转 rolC 基因 ECS GUS 染色及抗性胚诱导
注: a: 液体筛选第 3 代的 ECS GUS 染色; b: 对照; c 成熟胚
Figure 4 Transient GUS expression of the ECS with rolC gene
and inducement of embryos
a: Transient GUS expression of third-generation sub-cultrued
ECS; b: Non-transformed ECS; c: Somatic embryos
1.4 转 rolC 基因野生蕉 PCR 分子鉴定、GUS 和 rolC
基因表达分析
取再生转化苗的根部和叶片进行 GUS 基因表
达分析，GUS 基因在转 rolC 基因再生苗的根和叶
片部位均能检测到 GUS 基因的表达( 图 5)，说明
GUS 基因已经整合到野生蕉的基因组中并能够成
功表达。同时，以具有 GUS 活性的转化野蕉总 DNA
为模板，以未经转化的材料和质粒 pCB121-rolC 作
为对照，用 rolC 基因特异引物进行了 PCR 分子检
测，从 PCR 扩增产物电泳结果可知(图 6)，转化野
蕉总 DNA 均可获得大小约为 550bp 的的特异性条
带，而对照则无，说明 rolC 基因已整合到野生蕉基
因组中。
图 5 转 rolC 基因再生苗 GUS 染色
注: A 野生蕉根 GUS 染色; B: 野生蕉叶片 GUS 染色
Figure 5 Transient GUS expression of the wild banana with
rolC gene
Note: A: Transient GUS expression in the root of the wild
banana; B: Transient GUS expression in the leaf of the wild
banana
图 6 转 rolC 基因再生苗 PCR 检测
注: M: 100 bp DNA 分子量标记；1:阳性对照(pCB121-rolC);
2:未转化植株对照; 3-8: 转基因植株
Figure 6 Detection of regenerated plants by PCR
Note: M: 100 bp DNA marker; 1: pCB121-rolC as positive
control; 2: Non-transformed plant; 3-8 PCR product of
transgenic clones