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医学遗传学与疾病研究
(
网络版
), 2012
年
,
第
1
卷
,
第
3
篇
,
第
15
-
18
页
Yixue Yichuanxue Yu Jibing Yanjiu (Online), 2012, Vol.1, No.3, 15
-
18
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16
1
结果与分析
研究显示室温孵育
4 h
后，乳汁中的内源性
miRNAs
稳定在初始量的在
37%
至
70%
范围内，到
8 h
和
24 h
后分别降至初始量的
16%
和
8%
；而外源
性
miRNA
在孵育
0.5 h
后就降到了初始量的
0.13%
(
图
1A)
。在
-20
℃
冻融处理
1~6
次后，乳汁中的内
源性
miRNAs
稳定在
25%~46%
的水平，但外源性
miRNA
在冻融
1
次后就降到了初始量的
0.95%
(
图
1B)
。在
100
℃
处理
10 min
后，乳汁中的内源性
miRNAs
的表达量降到初始量的
29%
，而外源性
miRNA
则降解到初始量的
0.63% (
图
1C)
。
RNA
酶
A/T1
在
37
℃
消化
1 h
后，乳汁中的内源性
miRNAs
降到了初始量的
49%
，而外源性
miRNA
在初始量
的
0.69% (
图
1D)
。
上述结果表明，在
4
种体外不同处理条件下，
性降解
(P<0.01)
。内源性
miRNAs
降解为初始量的
25%~70%
之间，而外源
miRNA
则急剧降解至初始
量的
0.06%~0.96%
。研究结果说明人乳汁中内源性
miRNAs
较外源性
miRNAs
在体外不同环境中具有
更好的稳定性。
2
讨论
本研究结果显示人乳汁在经过常温存放，
-20
℃反复
冻融和煮沸处理后其内源
miRNAs
仍然存在较高的
表达量，这与
Mitchell
等
(2008)
在血液中证实
miRNAs
可以稳定表达的研究相似。我们的研究结
果显示人乳汁中的内源
miRNAs
较外源
miRNAs
具
有更强的抵御
RNA
酶
A/T1
降解的能力，这与
Kosaka
等
(2010)
证明人奶
miRNA
可以抵抗
RNA
酶
降解结果相同。根据
Pegtel
等
(2010)
的报道，这些
图
1
人乳汁中内源性
miRNAs
和外源性
miRNAs
在体外不同处理环境下的相对表达量变化
注
:
人乳汁经
4
种不同处理前后
9
个内源性免疫相关
miRNAs
和
1
个外源性
miRNA (ath-miR-159a-3p)
的相对表达量
;
人乳汁
(A) 26
℃孵育
0 h, 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h, 24 h; (B) -20
℃和室温冻融
1~6
次
; (C) 100
℃孵育
10 min; (D) RNA
酶
A/T1 37
℃消
化
1 h; **
表示处理前后的差异经
t
检验达极显著水平
(P<0.01)
Figure 1 The changes of relative expression between endogenous miRNAs and exogenous synthetic miRNAs under various harsh
conditions
Note: The expression changes of a spiked-in
Arabidopsis thaliana
miRNA (Exogenous ath-miR-159a-3p) and of the nine
immune-related miRNAs under various harsh conditions; Breast milk was incubated at (A) 26
℃
for 0 h, 0.5 h, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h or
24 h; (B) subjected to six freeze-thaw cycles at -20
℃
, (C) incubated at 100
℃
for 10 minutes, and (D) treated with RNase A and T1
for 60 minutes at 37
℃
; The statistical significance was calculated by Student’s t-test (**p<0.01); Values are means
±
s.d