医学检验检疫杂志
(
网络版
), 2012
年
,
第
1
卷
,
第
2
篇
,
第
7
-
14
页
Yixue Jianyan Jianyi Zazhi (Online), 2012, Vol.1, No.2, 7
-
14
10
图
3
pET
-
32
a(+)
重组质粒中插入的
HA
基因测序结果
注
:
全长序列为插入到
pET
-
32
a(+)-ORF
重组质粒的
HA ORF
基因的测序结果
;
阴影部分为插入到
pET
-
32
a(+)-HA
重组质粒
的
HA
抗原表位基因测序结果
Figure 3 Sequencing of the HA gene inserted in recombinant plasmid pET
-
32
a(+)
Note: The full length sequence is the sequencing result of HAORF inserted in pET
-
32
a(+)-ORF recombinant plasmid; The sequence
highlighted with shadow is the sequencing result of HA epitopes inserted in pET
-
32
a(+)-HA recombinant plasmid
表位基因的诱导表达中，
IPTG
对目的蛋白表达量
影响不大，但明显与诱导时间长短有关。当诱导
表达过夜时，目的蛋白表达量最高。诱导表达菌体
超声波沉淀物在约
48.1
kD (27.7 kD+20.4 kD)
处出
现大量与预期目的一致的表达产物堆积，而上清
及未诱导对照在该位置未发现有目的表达产物出
现。图
4
和图
5
分别显示了
HA ORF
和
HA
抗原表
位重组表达质粒在
1
mmol/L IPTG
诱导作用下，表
达不同时间后重组蛋白表达量的变化情况。
1.5
HA
抗原表位重组表达蛋白纯化
HA
抗原表位重组蛋白包涵体经
6
×His-tagged
protein
纯化试剂盒纯化后，样品经
SDS-PAGE
电
泳分析，结果在约
48.1
kD
处出现预期的目的重组
蛋白条带，另外，在低于该位置也有数条较较明
显的重组蛋白条带出现
(
结果图略
)
。
1.6
Western-Blot
试验
Western-Blot
试验结果显示，转移到硝酸纤维
素膜上的
HA
抗原表位重组表达纯化蛋白，分别能
与
HA
抗原表位重组蛋白的
SPF
鸡高免血清及
H5
亚型
AIV
标准阳性血清进行杂交显色，在
48.1
kD
位置及低于该位置的多个地方出现明显的特异性
杂交带，而未免疫
SPF
鸡血清对照在任何位置均
无特异性杂交带出现
(
图
6)
。
2
讨论
H5N1
禽流感是近年来在亚洲地区发生的较大
规模高致病性禽流感，对禽类和人畜生命安全均
造成了较大威胁。研究开发相关防治技术是有效
防控该病的重要手段。本研究通过基因分析，研究
图
4
诱导时间对
HAORF
重组蛋白表达的影响
(1
mmol/L IPTG)
注
: 1:
蛋白质
Marker; 2: pET
-
32
a(+)-ORF
未诱导对照
; 3
~7:
分别为
pET
-
32
a(+)-ORF
诱导表达
2
h, 4 h, 6 h, 8 h
和过夜
Figure 4 The affection of inducing time on the expression of
HAORF recombinant protein (1 mmol/L IPTG)
Note: 1: Protein marker; 2: pET
-
32
a(+)-ORF non-induced
control; 3~7: pET
-
32
a(+)-ORF induced for 2 h, 4 h, 6 h, 8 h
and overnight
