医学检验检疫杂志
(
网络版
), 2012
年
,
第
1
卷
,
第
1
篇
,
第
1
-
6
页
Yixue Jianyan Jianyi Zazhi (Online), 2012, Vol.1, No.1, 1
-
6
3
(1993)
特异性检测到具有
spvR
基因的沙门氏菌。
1.3
对沙门氏菌血清型的检测
1.3.1
对编码
H1
相抗原的
fliC
基因的检测
Wei
和
Joys (1985)
对检测出的
fliC
基因序列进
行分析,发现两个保守性
100%
的区域和一个伤寒
沙门氏菌特有的区域,李景鹏等
(1997)
设计引物对
fliC
基因的保守区进行扩增,特异性的检测了沙门
氏菌。
Sonne-Hansen
和
Jenabian (2005)
利用沙门氏
菌编码
H1
的鞭毛蛋白
fliC
基因的可变性,对
96
株
沙门氏菌进行了检测,结果表明,传统血清分型方
法确定为不可分型的菌株,采用序列分型技术分型
是一个很好的选择。
1.3.2
对编码
Vi (Virulenee)
抗原基因的检测
Vi
抗原与沙门氏菌的毒力有关,伤寒沙门氏菌
的
Vi
抗原表达由基因
ViaA
和
ViaB
决定,
ViaB
基
因的功能是编码
Vi
多糖的结构基因。对编码
vi
抗
原基因的检测,可以对具有
vi
抗原的特定血清型沙
门氏菌的检测。
Baker
等
(2005)
对
60
株伤寒沙门氏
菌和
48
个伤寒病人的血样的进行了
Vi
抗原基因的
PCR
检测,被检的
48
个血样中有
42
个
PCR
检测
结果为阳性伤寒沙门氏菌。这一结果表明,可以通
过
PCR
对伤寒病人的
vi
抗原基因的检测,达到对
已经接种伤寒疫苗地区伤寒发病率的监测。
1.3.3
多种抗原相结合确定沙门氏菌血清型
Song
等
(1993)
利用伤寒沙门菌的
H
抗原和
Vi
抗原基因引物作
PCR
扩增检测伤寒沙门菌,结果两
种基因扩增都有较高特异性和敏感性,可提高伤寒
病的诊断率,使该病得到快速诊断和早期治疗。
Hirose
等
(2002)
根据编码
O
、
H
和
vi
抗原的基因
tyv
(
rfbE
)
、
prt
(
rfbS
)
、
fliC-d
、
fliC-a
和
v
iaB
,
快速准
确的检测出临床症状为伤寒和副伤寒的血清型菌
株。
Lim
等
(2003)
通过同时扩增
rfbJ
、
fliC
和
fljB
基
因检测出鼠伤寒沙门氏菌。
1.3.4 16
SrRNA
、
23
SrRNA
保守序列的检测
Lagatolla
等
(1996)
通过对
16
SrRNA
、
23
S rRNA
保守序列的
PCR
扩增,可以区分不同的血清型的
沙门氏菌。
2
PCR
引物设计特异性问题
PCR
检测沙门氏菌存在的主要问题是引物特
异性的问题,引物特异性低常导致误检、漏检。
Rahn
等
(1992)
针对
invA
基因设计的一对引物扩增片段大
小为
284
bp
,
但有非目的片段扩增出来,显然是特
异性不够好;
Fluit
等
(1993)
设计的引物对很多种细
菌均扩增出多条非特异性条带;
Kwang
等
(1996)
设
计的引物对普通变形杆菌和蜂窝哈夫尼亚菌也可
扩增出非特异性条带;
Malomy
等
(2003)
比较了沙门
氏菌属
PCR
扩增常用的
4
对引物,结果发现其中三
对引物存在的漏检问题。仅仅根据电泳扩增条带的
结果很可能造成误判,需进一步的实验验证。因此,
应用
PCR
技术检测沙门氏菌对设计的引物要进行
必要的验证。
3
改进的沙门氏菌
PCR
检测方法
引物的设计应具有特异性,但是要找到一对完
全符合要求特异性基因并非易事,传统
PCR
还存在
其他方面的不足,为此,许多改进的
PCR
检测方法
发展起来。
3.1
实时荧光定量
PCR
检测
Daum
等
(2002)
建立了荧光
PCR
对食物中毒患
者的粪便和剩菜作了检测,结果表明与传统方法检
测的结果一致,并且利用
Taqman PCR
法在
3
h
内
检测出肌肉中的沙门氏菌,从而证明了荧光
PCR
的
时效性和准确性。张贻庆
(2006,
中国卫生检验杂志
,
16(7): 874-874)
利用荧光探针与
PC
检测相结合,对
食物中毒病原菌进行检测,结果可在
2
小时内得出
结果,同时还对病原菌作了定量分析。
3.2
多重
PCR
检测
邵碧英等
(2007)
建立了沙门氏菌属特异基因
hut
基因
(495
bp)
、
hilA
基因
(490
bp)
、
invA
基因
(284
bp)
和
hns
基因
(152
bp)
间的多重
PCR
检测方法,并
进行了灵敏度测试,结果表明,建立的多重
PCR
检
测结果与预期一致。
3.3
随机扩增多态性
DAN
检测
Nair
等
(2000)
利用
RFLP
技术在内的
3
种手段
分别检测了来自不同国家的
6
株伤寒沙门菌,结果
其它
2
种分型方法都显示
6
株细菌为同一基因型,
而
AFLP
却检测到不同的基因型,从而表明了
RFLP
技术的优越性。
Shabarinath
等
(2007)
在对
14
株同
种血清型的沙门氏菌菌株进行
RAPD
指纹分析时,
发现所有的血清型都具有独特
RAPD
指纹图,
RAPD
在菌株遗传变异的区分上是一个强有力的工
具,是其它方法不可比拟的。