昆虫分子生物学研究
(
网络版
), 2012
年
,
第
1
卷
,
第
2
篇
,
第
8
-
15
页
Kunchong Fenzi Shengwuxue Yanjiu (Online), 2012, Vol.1, No.2, 8
-
15
11
1.5
获选
Bt
菌株的
cry
基因型分析
10
株对小菜蛾有杀虫活性的
Bt
菌株均表达约
130
kD
的晶体蛋白，因此，我们推测这些菌株可能
含有
cry
1
类晶体蛋白基因型。我们选用两对
cry
1
基
因型鉴定通用引物
5
Kun2/5Kun2
和
5
Kun3/5Kun3
，
PCR
扩增出预期大小的
PCR
片段，分别为
1.6
kb
和
1.45
kb (
图
4)
。
结果证实获选的
10
株
Bt
菌株均为
cry
1
基因型。
1.6
获选的
10
株
Bt
菌株的半致死浓度和半致死时间
的生物测定
我们将已标定浓度的各杀虫蛋白溶液按一定
比例进行稀释，分别用无菌水和
HD
-
73
蛋白作阴性
对照和阳性对照，
72
h
后统计小菜蛾的死亡情况。
利用统计学软件
SPSS.19.0
进行半致死浓度
(
LC50)
和半致死时间
(
LT50)
分析
(
表
2;
表
3)
。
分析数据发现
Bt
菌株
S2685
-
1
和
S2737
-
3
与标准菌株
HD
-
73
在杀虫
活性上比较接近。
对半致死浓度
(
LC50)
进行分析：标准菌株
HD
-
73
的半致死浓度
(
LC50)
为
15.414
ng/mL
。
S2685
-
1
、
S2737
-
3
和
HD
-
73
的半致死浓度
(
LC50)
相近。
S2685
-
1
对小菜蛾的半致死浓度
(
LC50)
为
17.113
ng/mL
；
S2737
-
3
对 小 菜 蛾 的 半 致 死 浓 度
(
LC50)
为
25.782
ng/mL
。
可见
S2685
-
1
和
S2737
-
3
在杀虫毒力
上比较突出，值得关注与进一步研究。
对半致死时间
(
LT50)
进行分析：标准菌株
HD
-
73
的半致死时间
(
LT50)
为
35.917
h
。
S2737
-
3
、
S2685
-
1
和标准菌株
HD
-
73
的半致死时间
(
LT50)
相近。
S2685
-
1
对小菜蛾的半致死时间
(
LT50)
为
37.343
h
，
S2737
-
3
对
小菜蛾的半致死时间
(
LT50)
为
36.825
h
。
可见
S2685
-
1
和
S2737
-
3
在杀虫时间上与
HD
-
73
十分接近。
图
4
PCR
鉴定分析
10
株
Bt
菌株的结果
Figure 4 The electrophoretic analysis of 10
Bt
strains with
specific PCR
注
:
A: M:
核酸分子量标准
;
引物
K5un2/K3un2
在
10
株
Bt
菌
株及标准菌株
HD
-
73
中
PCR
扩增产物
, 1
~10
为
Bt
菌株
S2685
-
1,
S2737
-
3,
S2796
-
2,
S2809
-
1,
S2852
-
1,
S2852
-
2,
S2852
-
3,
S2852
-
4,
S2852
-
5,
S2853
-
1, 11
为标准菌株
HD
-
73;
B:
引物
K5un3/K3un3
在
10
株
Bt
菌株及标准菌株
HD
-
73
中
PCR
扩增产
物
;
菌株位置与
A
图一致
Note: M: Nucleic acid molecular weight standard marker; A:
Electrophoresis PCR amplification: 1~10 (S2685
-
1,
S2737
-
3,
S2796
-
2,
S2809
-
1,
S2852
-
1,
S2852
-
2,
S2852
-
3,
S2852
-
4,
S2852
-
5,
S2853
-
1,
HD
-
73
）
are PCR products by primer pairs
K5un2/K3un2 respectively; B: The same
Bt
strains’ electrophoresis
PCR amplification are PCR products by primer pairs K5un3/K3un3
respectively
表
2 10
株
Bt
菌株对小菜蛾幼虫的半致死浓度
(
LC50)
生物测定
Table 2 The probit analysis of LC50 of 10
Bt
strains’ toxicity against susceptible
Plutella xylostella
(
Lepidopter
)
供试菌株
Tested
strain
起始浓度
Original
concentration
(
ng/mL)
起始死亡率
Original
death rate
(%)
回归方程
Regression equation
斜率
±
标准误
Slope±SE
相关系数
Correlation
coefficient
半致死浓度
LC50
(
ng/mL)
95%
置信限
95%
confidencial
limit (ng/mL)
毒力指数
*
Toxicity
index*
S2685
-
1 50
83.33
y=
-
2.526
+2.048x
2.048
±0.411
0.882
17.113
12.080
~21.419
0.901
S2737
-
3 50
73.33
y=
-
2.235
+1.584x
1.584
±0.395
0.991
25.782
18.927
~35.462
0.598
S2796
-
2 100
76.67
y=
-
11.294
+6.062x
6.062
±0.115
0.915
72.973
67.247
~78.782
0.211
S2809
-
1 50
66.67
y=
-
3.990
+2.571x
2.571
±0.460
0.964
35.661
29.790
~45.507
0.432
S2852
-
1 100
86.67
y=
-
11.639
+6.328x
6.328
±1.131
0.969
69.072
63.316
~74.182
0.223
S2852
-
2 100
70.00
y=
-
13.793
+7.086x
7.086
±1.220
0.977
88.403
82.466
~97.902
0.174
S2852
-
3 100
70.00
y=
-
13.638
+7.042x
7.042
±1.203
0.995
86.422
80.748
~95.093
0.178
S2852
-
4 50
66.67
y=
-
2.652
+1.738x
1.738
±0.407
0.976
33.542
26.055
~49.150
0.460
S2852
-
5 150
73.33
y=
-
26.205
+12.311x 12.311±2.227
0.993 134.478
129.519
~140.073 0.115
S2853
-
1 150
70.00
y=
-
28.399
+13.303x 13.303±2.304
0.982 136.388
131.771
~141.899 0.113
HD
-
73
30
83.33
y=
-
1.701
+1.432x
1.432
±0.27
0.976
15.414
10.013
~21.102
1.000
注
:
毒力指数为标准菌株的半致死浓度
(
LC50)
除以出发菌株的半致死浓度
(
LC50)
的比值
,
比值越大
,
毒性越强
,
反之
,
毒性越小
Note: Toxicity index means the tested strain’s LC50 divided by the HD
-
73’
s LC50. As the ratio be more larger, the toxicity be more
higher; otherwise, the toxicity be more weaker
