昆虫分子生物学研究
(
网络版
), 2012
年
,
第
1
卷
,
第
2
篇
,
第
8
-
15
页
Kunchong Fenzi Shengwuxue Yanjiu (Online), 2012, Vol.1, No.2, 8
-
15
10
1.2
获选
Bt
菌株的伴胞晶体蛋白观察
活化
10
株候选
Bt
菌株，在
1/2
LB
培养基，
30
℃，
220
r/min
的条件下培养，在
Bt
菌株芽孢形成期，挑
取少量菌体，用石碳酸复红染液染色，先在光学显
微镜
(
油镜
)
下进行观察，在扫描电子显微镜下对菌
株进行观察。文中仅列举部分
Bt
菌株的镜鉴形态。
如图
1
所示，在油镜下观察，获选
Bt
菌株
S2796
-
2
，
S2809
-
1
，
S2852
-
2
，
S2852
-
3
均有白色芽孢及红色的伴
孢晶体产生。在电镜下观察，获选
Bt
菌株
S2796
-
2
，
S2809
-
1
，
S2852
-
2
，
S2852
-
3
均有菱形的伴孢晶体产生。
图
1
一些
Bt
菌株镜鉴的菌体和晶体蛋白形态
Figure 1 Micrographs of some
Bt
strains observed under optical
microscope
注
:
光学显微镜镜鉴图片
(100
×油镜
)
，
A: S2796
-
2,
B: S2809
-
1,
C: S2852
-
2,
D: S2852
-
3
；
扫描电子显微镜观察
(20
kV, 9.7 mm
×
10.0
k), E: S2796
-
2,
F: S2809
-
1,
G: S2852
-
2,
H: S2852
-
3
Note: A, B, C, D: Micrographs of
Bt
S2796
-
2,
S2809
-
1,
S2852
-
2
and S2852
-
3
by optical microscope; E, F, G, H:
Bipyramid crystal from
Bt
S2796
-
2,
S2809
-
1,
S2852
-
2,
S2852
-
3
during sporulation under scanning electron microscope
1.3
获选
Bt
菌株的生长曲线分析
对小菜蛾有杀虫活性的
10
株获选
Bt
菌株进行了
菌株生长曲线分析
(
图
2)
。
通过比较，发现
10
株获选
菌株的和标准菌株
HD
-
73
在
LB
培养基中的生长状
况基本相似。获选
Bt
菌株的迟缓期呈现不明显的状
态，
4
~20 h
时，
Bt
菌株快速的生长，进入对数生长期，
20
~30 h
时，
Bt
菌株进入稳定期，这时的菌液的
OD600
值约为
5.0
左右，
32
h
后进入衰亡期。
1.4
获选的
10
株
Bt
菌株晶体蛋白的
SDS-PAGE
分析
对小菜蛾有杀虫活性的
10
株
Bt
菌株，
G-Tris
培
养基，
220
r/min
，
30
℃培养
4
d
后，提取菌株的伴胞
晶体蛋白并做
SDS-PAGE
分析，它们在芽孢形成期
产生约为
130
kD
的杀虫晶体蛋白
(
图
3)
。
图
2 10
株
Bt
获选菌株的生长曲线图
Figure 2 Growth curve of the standard strain HD
-
73
and 10
tested
Bt
strains
图
3 10
株
Bt
菌株的伴胞晶体
SDS-PAGE
电泳图
Figure 3 SDS-PAGE profiles of parasporal crystal proteins of
10
Bt
strains during sporulation
注
:
A: M:
蛋白质分子量标准
; 1
~8: S2685
-
1,
S2737
-
3,
S2796
-
2,
S2809
-
1,
S2852
-
1, 2852
-
2,
S2852
-
3,
S2852
-
4,
S2852
-
5; 9:
为标准菌株
HD
-
73;
B: 10~12: S2852
-
5,
S2853
-
1;
12:
标准菌株
HD
-
73
Note: M: Protien molecular weight standard marker; 1~8 of Figure 3
A represents the parasporal crystal proteins of
Bt
strains
S2685
-
1,
S2737
-
3,
S2796
-
2,
S2809
-
1,
S2852
-
1,
S2852
-
2,
S2852
-
3,
S2852
-
4,
S2852
-
5
respectively, and 9 is standard
strain HD
-
73; 10
~12 of Figure 3 B represents the parasporal
crystal proteins of
Bt
strains 2852
-
5, 2853
-
1,
and 12 is standard
strain HD
-
73
