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基因组学与生物技术(网络版), 2012 年, 第 1 卷, 第 7 篇, 第 40-44 页
Jiyinzuxue Yu Shengwu Jishu (Online), 2012, Vol.1, No.7, 40-44
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图 3 PCR 筛选阳性克隆子
注: M: DNA Ladder Marker D505A; 1~6: 1~6 号克隆子用引
物 C3-5/C3 -3 进行 PCR 反应后生成的产物
Figure 3 Positive clones screened by PCR
Note: M: DNA Ladder Marker D505A; 1~6: The results of
recombinants (No.1~6) detected by PCR with C3-5/C3-3 primers
图 4 FokⅠ酶切分析 1 号克隆子
注: M: DNAMarker D515A; 1: 1 号克隆子的 FokⅠ酶切图谱
Figure 4 Restriction enzymetic analysis of recombinant plasmid
(No.1) digested by FokⅠ
Note: M: DNA Ladder Marker D515A; 1: The result of
recombinant plasmid (No.1) digested by FokⅠ
图 5 PCR 筛选阳性克隆子
注: M: DNA Ladder Marker D505A; 1~3: 克隆子 1~3 用
K2-5/K2-3 引物进行 PCR 反应后生成的产物; 4~6: 克隆子
1~3 用 C3-5/C3 -3 引物进行 PCR 反应后生成的产物
Figure 5 PCR for screening positive clones
Note: 1~3: The result of recombinant 1~3 detected by PCR
with K2-5/K2-3 primers; 4~6: The result of recombinant 1~3
detected by PCR with C3-5/C3-3 primers
体产生(图 6)。随后的 SDS-PAGE 蛋白电泳可以看
出(图 7)，IPSC3 -1 在 12 h 就能够产生 130 kD 蛋白
带，而 IPS 和 Bt S3299- 1 均无蛋白带产生。由此可
以证明，cry1Ac31 基因在 IPS 中得到了较好的表达。
图 6 菌株生长 18 h 时的光学镜检观察
注: A: IPS; B: IPS-pBU4; C: IPSC3 -1; D: S3299 -1
Figure 6 Light micrographs of the tested strains observed after
18 hours culture
Note: A: IPS; B: IPS-pBU4; C: IPSC3-1; D: S3299-1
图 7 Cry1Ac31 晶体蛋白的 SDS-PAGE 分析
注 : M: TaKaRa Protein Molecular Weight Marker (Broad)
D530S; 1: S3299-1 培养 18 小时后的蛋白产物; 2: IPSC3-1
培养 18 小时后的蛋白产物; 3: IPS-pBU4 培养 18 小时后的
蛋白产物; 4: IPS 培养 18 小时后的蛋白产物
Figure 7 Cry1Ac31 protein generated after 18 hours culture
identified by SDS-PAGE
Note: M: TaKaRa Protein Molecular Weight Marker (Broad); 1:
S3299-1; 2: IPSC3 -1; 3: IPS-pBU4; 4: IPS
2 讨论
由于 pBU4 载体拥有 Eco RⅠ、SacⅠ、Kpn Ⅰ、
Xma Ⅰ、BamHⅠ、XbaⅠ、SalⅠ、PstⅠ、SphⅠ和
HindⅢ 10 个多克隆酶切位点，对 Amp 和 Tc 有抗
性，能够在大肠杆菌和芽孢杆菌中穿梭复制，因此，
本研究构建的 pBUC3 是一个拥于 pBU4 特点，能
在大肠杆菌和芽孢杆菌中均能大量的复制表达，这
个特点是该载体能够电转化芽孢杆菌并大量表达
蛋白的先决条件。由于 pBUC3 拥有了能够在芽孢
杆菌中表达的强启动子，并且其表达不依赖于芽孢
期的到来就能大量表达，因此，在实际的应用中，
菌体培养的时间比依赖于芽孢形成而表达的载体