分子植物育种
(
网络版
), 2016
年
,
第
14
卷
,
第
1087-1094
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2016, Vol.14, 1087-1094
Copyright © 2016 BioPublisher 1092
用于差异蛋白基因表达的
RT-PCR
分析验证。并对部
分种子继续放置于
4
℃进行萌发实验，
15 d
后统计萌
发率。综合实验结果对独行菜种子萌发低温相关响应
蛋白的表达量与低温萌发关系进行分析。
筛选获得的蛋白表达情况采用荧光定量
RT-PCR
进行检测，具体操作如下：采用
Trizol
法
(TIANGEN)
提取独行菜种子总
RNA
。参照
Revert Aid
First Strand cDNA Synthesis Kit (Thermo)
操作说明书
对上述
RNA
样本进行第一链
cDNA
的合成。根据
MASCOT
搜索结果，利用
Primer5.0
根据目标蛋白
相应核苷酸序列设计引物，引物序列及退火温度和
扩增产物大小
(
表
1)
。以
ACTIN
为内参基因，利用
UltraSYBR Mixture(With ROX II)(
康为世纪
)
对目的
基因进行表达分析。每个样品做三次生物学重复。
表
1
关键蛋白
qRT-PCR
分析的引物序列及预期产物大小
Table 1 Sequences of the primers used in qRT-PCR analysis for key protein and the product size
引物名
Primer
序列
5
，
___
3
，
Sequences5
，
___
3
，
退火温度
Annealing Temperature
预期产物大小
(bp)
Product Size (bp)
CDCF
CTCGTGCTGTGGCTAATGAA
60.1
120
CDCR
TCTCTGCCTCCTCAAATGCT
60.01
120
P12F
GAATAGCCCTTGTCGGTTCA
60.07
109
P12R
CACTTGTCCTACCGCGAACT
60.31
109
Hsp17.6F
TCTTCAGTCCAGGCAAATCC
57.8
172
Hsp17.6R
AACAGGCGAAACAGCATCTT
58.21
172
actinF
CGACGATTCCACCACTAAGC
60.66
140
actinR
TGAGGTTCTTTACCAGCCATCT
60.13
140
作者贡献
李萍萍是实验研究、数据分析的主要执行人，
并完成论文初稿的写作；赵惠新、赵和平指导论文
写作和修改；曾卫军、赵和平进行中英文摘要的修
改；曾卫军、赵和平、李艳红、葛风伟、祝长青指
导实验设计和数据分析；卢函，周茜和赵君洁参与
实验实施，实验结果分析，图表处理；赵惠新是实
验设计者、项目的构思者及负责人。全体作者都阅
读并同意最终的文本。
致谢
本研究由国家自然科学基金
(31460041)
、新疆
维吾尔自治区教育厅重点实验室项目
(XJTSWZ-
2015-01)
、抗性基因资源与分子发育北京市重点实
验室开放课题
(2015GD03)
和新疆师范大学博士启
动基金项目
(XJNUBS1416)
共同资助。
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