基本HTML版本
基因组学与生物技术
(
网络版
), 2013
年
,
第
2
卷
,
第
7-10
页
Jiyinzuxue Yu Shengwu Jishu (Online), 2013, Vol.2, 7-10
http://gb.biopublisher.cn
9
表
1
分离胶组成
Table 1 Resolving gel ingredients
药品
9% Gel
Milli-Q H
2
O
15.53 mL
4xTris.HCl/SDS
，
pH8.8
缓冲液
7.5 mL
40% (W/V)
丙烯酰胺
/
甲叉双丙烯酰胺
(29:1)
溶液
6.75 mL
10%
过硫酸铵
(Ammonium persulfate, APS)
200 μL
20 μL TEMED
20 μL
表
2
浓缩胶组成
Table 2 Stacking gel ingredients
药品
5% Gel
Milli-Q H
2
O
5 mL
4xTris.HCl/SDS
，
pH6.8
缓冲液
2 mL
40% (W/V)
丙烯酰胺
/
甲叉双丙烯酰胺
(29:1)
溶液
1 mL
10%
过硫酸铵
(Ammonium persulfate, APS)
60 μL
20 μL TEMED
6 μL
注：各组分要按顺序加入，
10%
过硫酸铵需现用现配，配制量适用于
4
块凝胶的制备
Note: The dosage is for 4 pieces of gel; each component was added according to the order listed
3.4
电泳
(1) 4
℃下溶解蛋白样品，混匀后，取
30 μL
，
100
℃
水浴
10 min
，冷却至室温。
(2) 12000×g
瞬时离心，取
20 μL
上样，以
10 μL
Fermentas PageRuler™ Unstained Protein Ladder
为
参照。
(3)
在电泳槽中加入
1× Tris-glycine-SDS
电泳缓冲
液到达所需刻度。
(4) 25
℃下采用恒压进行电泳，先设定电压为
80V
，待溴酚蓝迁移出浓缩胶（约
30 min
），且条
带较平整时调整电压为
120 V
，直至溴酚蓝迁移至
凝胶底端以上约
5 mm
处时停止电泳
(
约
90 min)
，
总电泳时间约
2 h
。
3.5
染色
加入考马斯亮蓝
R250
染色液，染色
30 min
。
3.6
脱色
移去染液，加入脱色液，
3 h
后更换脱色液，
9 h
后再更换一次，继续脱色
12 h
。
3.7
拍照
用
Bio-Rad Gel Doc™ XR+ System
进行图像采集，
使用凝胶图像分析软件
BandScan5.0
分析
ICPs
的
表达量
(Wang Xi, 2011)
。
4
例证分析
本案例中，我们以
Bt
分离株
S2096
在不同时
间段蛋白的表达量为实验材料，
SDS-PAGE
结果
电泳分析
Bt
菌的晶体蛋白。经过菌株培养、蛋白
提取、
SDS-PAGE
电泳检测，获得不同时间段蛋
白的表达情况（
Xuanjun Fang, et al., 2013
），结果
如图
2
所示，图中为
S2096
几个不同时间段的蛋
白表达结果，由图示可知，
S2096
菌株在
48h
时
的蛋白表达量最大。
图
2
菌株
S2096
不同时期表达蛋白的
SDS
分析
注：
M
：
Fermentas PageRuler™
蛋白梯
Figure 2 SDS analysis of protein expression after different
periods of S2096 strain
Note: M: Fermentas PageRuler™ Unstained Protein Ladder