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李健等：凤丹
SRAP-PCR
反应体系的优化
1005
3.4 SRAP-PCR
扩增程序
‘凤丹’
SRAP-PCR
的扩增程序参照
Li
和
Qurios
(2001)
的标准程序并做出调整：
94
℃预变性
5 min
；
94
℃变性
40 s
，
37
℃复性
50 s
，
72
℃延伸
1.5 min
，
8
个循环反应；
94
℃变性
40 s
，
50
℃复性
50 s
，
72
℃延伸
1.5 min, 32
个循环反应；
72
℃延伸
10 min
，
4
℃保存。
3.5 SRAP-PCR
反应体系单因子试验
在其它反应条件不变的情况下，研究了
20 μL
反应体系中不同浓度
Mg
2+
，
dNTPs, Taq DNA
聚合
酶
,
引物以及模板
DNA
浓度
(
表
2)
对
SRAP
扩增的
影响。引物同上，试验设
2
次重复。
3.6 SRAP-PCR
多态性引物的筛选
在正交试验结果分析的基础上，从正向引物
(Me)25
个和反向引物
(Em)20
个共
500
对引物组合
中，筛选适合江南牡丹‘凤丹’的引物。所用
PCR
扩增体系为正交设计所得出的最佳体系。
作者贡献
李健、胡永红、秦俊和蒲立栋是本研究的实验
设计和实验研究的执行人；李健和胡永红完成数据
分析，论文初稿的写作；韩继刚、刘炤、蒲立栋参
与实验设计，试验结果分析；奉树成指导实验设计，
数据分析，论文写作与修改。全体作者都阅读并同
意最终的文本。
致谢
本研究由上海市科学技术委员会和上海市绿
化局
(
11ZR1436100, 11391901101, F122431
)
资助。
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