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分子植物育种
(
网络版
)
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online)
1045
图
5 RT-PCR
分析红掌
AaCBP1
基因的低温诱导特性
Figure 5 RT-PCR analysis of induction of
Anthurium AaCBP1
gene expression under low temperature
利用已知的基因序列，设计特异引物，克隆钙
结合蛋白基因片段，把克隆得到的片段连接到
T-easy
载体，转入大肠杆菌
DH5α
，经多次测序确定
基因序列。利用
NCBI
、
DNAMAN
等软件对核苷酸
序列和编码的氨基酸序列进行分析。
3.3 RT-PCR
分析基因表达模式
采用
RT-PCR
分析基因的表达模式，所用引
物序列见表
1
。从红掌冷处理和对照样本中分别
提 取 总
RNA
，取
1 μg
总
RNA
用来做反转录
(Powerscript reverse transcriptase, Clontech, CA, USA)
。
PCR
扩增条件为：
94
℃预变性
4 min
，随后为特定
循环数的
94
℃变性
30 s
，
57
℃退火
30 s
，
72
℃延伸
45 s
。其中，
AaCBP1
设
27
个循环，
Actin
设
25
个循
环。最后一个循环结束后，
72
℃再延伸
5 min
。
PCR
产物用
1.2 % (w/v)
的琼脂糖凝胶进行分离，
EtBr
染色分析。
作者贡献
刘晓静是本研究的实验设计和实验研究的执行人；刘晓
静、田丹青和及潘晓韵完成数据分析，论文初稿的写作；葛
亚英,王炜勇和潘刚敏参与实验设计，试验结果分析；郁永
明是项目的构思者及负责人，指导实验设计，数据分析，论
文写作与修改。全体作者都阅读并同意最终的文本。
表
1 RT-PCR
所用引物序列
Table 1 Primer sequences for RT-PCR
基因名称
Gene name
正向引物
Forward primer
反向引物
Reverse primer
AaCBP1
5'
-
GGTTACAATCCAACTGTGGACAACC
-
3'
5'
-
GACTCTAAGGGAGAGTCGACATAAG
-
3'
Actin
5'
-
CGAAGGCCAATAGAGAGAAGATG
-
3'
5'
-
CAGGCAGCTCATAGGTCTTCTC
-
3'
致谢
本研究由浙江省自然科学基金
(LQ12C15003)
资助。
参考文献
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