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林秀琴等
:
应用
GISH
技术鉴定甘蔗野生种外源染色体
1027
3.25
，臂比大于
2:1
的染色体占
0.15%
，核型属
2 B
类型，核型公式为
2n=54=16 m+38 sm
。
表
1 F
1
代染色体组成分析
Table 1 Chromosome constitution in F
1
progeny
中期细胞
Metaphase cells
染色体数目
Chromosome number
体细胞染色体
Somatic chromosomes
甘蔗属热带种染色体
(
母本
)
Chromosome from
saccharun
officinarum
(female)
野生种滇蔗茅染色体
(
父本
)
Chromosome from the wild
erianthus
rockii
(male)
1
55
40
15
2
54
37
17
3
55
40
15
4
54
39
15
5
54
40
14
6
56
39
17
7
55
40
15
8
54
39
15
9
54
39
15
10
56
41
15
11
54
39
15
众数
Mode
54
39
15
图
2
中期细胞及荧光核型图
Figure 2 Metaphase cells and the karyogram of the fluorescence
2
讨论
2.1
染色体制片质量对
GISH
实验效果的影响
染色体制片质量
(
染色体分散清晰
,
互不重叠
或重叠较少
,
染色体形态良好的制片
)
是影响
GISH
实验效果好坏的基础，因此在实验过程中要根据具
体情况调整供试材料预处理的条件，提高制片水
平，以得到高质量的染色体制片。甘蔗及其野生种
均属于小染色体类型，又加上数目多，且形态相似
的特点，采用滴片法制备染色体玻片标本，是一种
简便有效的方法。金危危等
(2001)
研究表明，滴片
法能够获得良好的荧光原位杂交效果。本实验结果
表明用对二氯苯水饱和溶液与
0.002 mol/L 8-
羟基
喹啉等体积混合液离体预处理子代根尖样品
(
室温
,
4 h)
，有利于积累更多的有丝分裂相及中期分裂相
细胞，用
0.075 mol/L KCl
室温低渗
1 h
，能使染色
体充分分散。采用现配的卡诺氏固定液固定根尖材
料，可以保存染色体的固有形态，增加了探针的穿
透能力，便于与靶
DNA
进行原位杂交。在滴片法
中
Mouras
等
(1978)
采用机械力将酶解的材料捣碎，
进一步用低离心率短暂离心的方法获得细胞悬液，
此法效果并非很好。主要是因为离心使上清液中的
大量细胞碎片与细胞混在一起，不利于染色体铺
展。本研究将酶解的材料捣碎在适量的卡诺氏固定
液中，将细胞悬液静置片刻去掉底部大块沉淀物