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分子植物育种
(
网络版
), 2013
年
,
第
11
卷
,
第
1019
-
1024
页
Fenzi Zhiwu Yuzhong (Online), 2013, Vol.11, 1019
-
1024
http://mpb.5th.sophiapublisher.com
Copyright © 2013 5
th
Publisher 1019
研究报告
Reseach Report
国槐
SRAP-PCR
反应体系的建立与优化
宋伟栓
1
,
庞彩红
2
,
李双云
2
,
李丽
2
,
杨克强
1
,
夏阳
2
1.
山东农业大学林学院
,
泰安
, 271018;
2.
山东省林业科学研究院林木遗传育种重点实验室
,
济南
, 250014
通讯作者：
xiayang0506@126.com
；
作者
分子植物育种
, 2013
年
,
第
11
卷
,
第
4
篇
doi: 10.5376/mpb.cn.2013.11.0004
这是一篇采用
Creative Commons Attribution License
进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用
,
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件的使用与传播。
引用格式
(
中文
)
：
宋伟栓等
, 2013,
国槐
SRAP-PCR
反应体系的建立与优化
,
分子植物育种
(online), 11(4): 1019-1024 (doi: 10.5376/mpb.cn.2013.11.0004)
引用格式
(
英文
)
：
Song et al., 2013, Establishment and Optimization of SRAP-PCR Reaction System in
Sophora japonica
L., Fenzi Zhiwu Yuzhong (online) (Molecular
Plant Breeding), 11(4): 1019-1024 (doi: 10.5376/mpb.cn.2013.11.0004)
摘
要
本实验以国槐叶片
DNA
为模板，利用
SRAP(
相关序列多态性
)
分子标记技术，采用
L
16
(4
5
)
正交设计和单因子设计
相结合的方法，对国槐
SRAP-PCR
反应体系中主要因素
(DNA, Mg
2+
, dNTPs, primer, ExTaqDNA
聚合酶
)
进行优化筛选，得出
如下结论：各因素不同水平对
PCR
反应结果都有显著影响，其中
ExTaq
酶量影响最大；筛选出各反应因素的最佳水平，确
立
SRAP-PCR
反应的最佳体系
(20 μL)
为：
Mg
2+
浓度
2.0 mmol/L
，模板
DNA 80 ng
，
dNTPs 2.5 mmol/L
，引物
0.6 μmol/L
，
ExTaqDNA
聚合酶
0.75 U
，
10
×
PCR buffer 2.5 mmol/L
；应用该优化体系对退火温度进行了筛选，得出
50
℃为最佳退火温度。
利用该优化体系，从
100
对
SRAP
引物组合中筛选出
6
对扩增条带清晰，多态性高的引物组合，多态性条带比率高达
88.55%
。
该优化体系的建立为下一步进行古国槐遗传多样性分析，新品种的选育和种质资源的保存利用等奠定了基础。
关键词
国槐
; SRAP;
正交设计
;
单因子优化
Establishment and Optimization of SRAP-PCR Reaction System in
Sophora
japonica
L.
Song Weishuan
1
, Pang Caihong
2
, Li Shuangyun
2
, Li Li
2
, Yang Keqiang
1
, Xia Yang
2
1. College of Foresty, Shandong Agricultural University, Taian, 271018, P.R. China
2. Shandong Provincial Academy of Forestry, Jinan, 250014, P.R. China
Corresponding author, xiayang0506@126.com;
Authors
Abstract
In this paper, an orthogonal of L
16
(
4
5
) design combined with single factor experiment was applied to optimize
SRAP-PCR amplification system of
Sophora japonica
L. Using genomic DNA extracted from
Sophora japonica
. leavies as template,
The effect of the main reaction system elements (DNA, Mg
2+
, dNTPs, primer, ExTaq DNA polymerase) on SRAP-PCR were tested.
and the results showed that the efects of each factor in diferent levels were found and the quantity of EXTaq DNA polymerase was
the most dominant factor afected on the result of PCR. A most suitable SRAP-PCR system for
Sophora japonica
L. Was established
that is total 20 μL reaction system containin: Mg
2+
2.0 mmol/L, DNA template 80 ng, dNTPs 0.15 mmol/L, primer 1 μmol/L10×PCR
buffer 2.5 mmol/L and ExTaq DNA polymerase 0.75 U. And the optimal annealing temperature was 50
℃
degrees. preservation
using laid a foundation Six primer pairs were screened out from 100 SRAP primer pair combinations based on their stable
amplification, clear banding patterns and good polymorphism by utilizing the SRAP reaction system. This will provide the basis for
the breeding of new varieties and germplasm resources.
Keywords
Sophora japonica
; SRAP; Orthogonal design; Single factor test
研究背景
国 槐
(
Sophora japonica
L.)
是 蝶 形 花 科
(
Papilionoideae
)
槐属
(
Sophora
)
植物，又叫槐树、巨槐、
细叶槐、中国槐、槐米树、守宫槐等，是我国特有
收稿日期：
2013
年
01
月
11
日
接受日期：
2013
年
03
月
13
日
发表日期：
2013
年
04
月
2
3
日
基金项目：本研究由山东省农业生物资源创新利用研究课题
(2001157)
资助